Hppd基因和抑制剂的制作方法(3)

本发明还包括HPPD多肽的衍生物和同系物。为某些目的，可通过核苷酸的取代、加入或删除来改变编码肽的核酸序列，借以提供功能等同分子，即功能保守变异体。例如，可用有相似性质的另一种氨基酸，例如带正电荷的氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氧酸)、带负电荷的氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)、极性中性氨基酸及非极性氨基酸取代序列内的一个或多个氨基酸残基。

4 生物活性测定 除草活性初筛实验结果见表 1, 在 100 μg/ml 浓度 除草活性采用油菜平皿法和稗草小杯法, 杀虫活性 下, 供试化合物对油菜的抑制活性普遍较低, 只有化合采用蚜虫触杀和小菜蛾浸叶法进行, 具体实验方法和实 物b10, b13 和b16 对油菜的生长有明显的抑制作用, 抑验数据处理方法见文献[10, 11]。 以化合物b14 为例, 个化合物对稗草表现出一定的活性, 对稗草株高的抑制在 1h nmr 谱中, 通过核磁共振氢谱对比可以得知反应 率略大于对照药剂草甘膦, 表明这些化合物对稗草的除发生在酚羟基上面, 与前文[10] 1 草活性要比对照药剂草甘膦的除草活性稍好, 但是总的 生成羧酸酯通过 h nmr谱比较和 x 射线衍射得到的结论一致。利用compound c(cc)抑制ampk活性会增加基础细胞自噬，而阻断了曲格列酮引起的自噬标记物lc3-Ⅱ的增加，相同的实验结果在转染了无活性的kd-ampk(kinase dead)质粒中也得到了证实。

埃博拉病毒是一类囊膜病毒，其对宿主的入侵可以分成两个重要步骤，首先是病毒粘附到宿主细胞膜表面，然后是病毒通过细胞内吞进入细胞内部，形成内吞体，在内吞体内，病毒发生膜融合过程，释放自身遗传物质。10.和λ噬菌体相比m13噬菌体的侵染循环的特点 1.m13dna不整合到细菌基因组中，不会变为静止状态2.细菌细胞不发生裂解，新的噬菌体颗粒组装，并从宿主细胞中释放。首先，病毒粘附到宿主细胞膜表面，然后通过细胞内吞进入细胞内部，形成内吞体，在内吞体内，病毒发生膜融合过程，释放自身遗传物质。

组合性化学物质文库是由化学合成或生物合成或者组合大量的化学“构件”(例如反应物)而产生的多种化学化合物的集合。结构生物学和药理基因组学物理有机化学1.具有重要生物功能的有机小分子物理有机化学基础2.分子有序聚集体3.功能有机分子构筑及其器件基础金属有机化学1.多核金属有机化合物及原子簇化合物2.主族金属有机化合物研究3.具有特殊材料功能的新型金属有机化合物 合成4.金属有机化合物在有机合成中应用有机合成化学1.环境友好的绿色合成反应2.新型反应试剂3.不对称合成4.天然产物全合成杂原子有机化学1.有机磷化学2.杂环化合物的合成方法学。浙江模拟）化合物f是一种重要的有机合成中间体，它的合成路线如下：（1）化合物f中官能团的名称是和，由a生成b的化学反应类型是．（2）写出化合物b的结构简式：．（3）写出化合物c与乙酸反应生成酯的化学方程式：．（4）某化合物是d的同分异构体，且分子中只有三种不同化学环境的氢．写出该化合物的结构简式：（任写一种）．（5）请根据已有知识并结合相关信息，写出以苯酚（）和ch2=ch2为原料制备有机物的合成路线流程图（无机试剂任用）．合成路线流程图示例如下：h2c═ch2ch3ch2brch3ch2oh．22．（2014春。

这也解释了为什么parp抑制剂在没有brca变异的肿瘤中也有一定的效果，以及各个化合物的抗肿瘤活性与其酶抑制活性不线性相关。a. 酶蛋白—底物复合物b. 酶蛋白—抑制剂复合物c. 酶蛋白—变构剂复合物d. 酶蛋白的无活性前体e. 酶蛋白—辅助因子复合物 3. 尼克酰胺在体内的活性形式是： a. tppb. nad+c. fad d. coq e. coa。功效用途：光果甘草提取物能深入皮肤内部并保持高活性，有效抑制黑色素生成过程中多种酶(如抑制酪氨酸酶)的活性，又能抑制多巴色素互变和dhica氧化酶的活性，是一种快速、高效、安全、绿色的美白祛斑化妆品添加剂。

李步海. 用染料修饰吐温80液-固萃取体系从猪心肌匀浆液中分离纯化心肌黄酶. 天然产物研究与开发, 1999年 06期14. 孙小梅。本次试验证明：保试达80毫升/桶，每亩250毫升，药后7天对牛筋草、小飞蓬、马齿苋等抗性杂草就有比较明显的除草效果，比同类产品除草更彻底。发明人还提出了下列不需进行脱氧就能防止或抑制纯水锅炉的水系统中的铁类金属腐蚀的抗蚀剂。

在一个实施方案中，使用本领域已知的方法诱变表达HPPD的细胞或生物体的群体，然后对这些细胞或生物体进行筛选或选择以鉴定对HPPD抑制剂的毒性作用有抗性的变异体。然后例如使用PCR技术从抗性细胞或生物体中分离变异的HPPD基因。

在另一个实施方案中，可体外对分离的HPPD基因进行随机或位点特异性诱变，然后将诱变的基因译本再导入适当的细胞如大肠杆菌细胞中，并按上述方法选择或筛选之。

在适当的宿主细胞中表达变异的HPPD基因，并将变异HPPD多肽的酶促性质与野生型HPPD相比较。给定的突变较好是产生保留有对4-羟苯基丙酮酸(OHPP)之酶促活性的HPPD变异多肽，即其可将OHPP转化成尿黑酸(并因而预期是在体内有生物学活性的)，同时与野生型HPPD相比表现对选择的除草剂有相对更大抗性的催化活性。当在为维持存活性而需要HPPD活性的细胞中表达时，该变异的HPPD表现有(ⅰ)单独即足以使表达它的细胞维持存活性的催化活性；或者与也在该细胞中表达的任何除草剂抗性HPPD变异体蛋白质结合，足以维持表达该蛋白质之细胞的存活性的催化活性，该变异蛋白质可以是与第一种变异体蛋白质相同或不同的；以及(ⅱ)比野生型HPPD有更大抗除草剂抗性的催化活性。

因此，任何一种特异性HPPD变异体蛋白质都不一定有为维持细胞存活性所需的总催化活性，但必须在单独或与同样HPPD变异体附加拷贝的催化活性和/或其他HPPD变异体蛋白质的催化活性合并的情况下，具有一定的催化活性，以便足可维持需要有HPPD活性参与的细胞存活性。例如，可以将编码突变体基因的多个拷贝导入细胞中，或者导入进一步包括相对强的启动子的基因，以提高变异体的产率，从而可将催化活性增至最大的可接受的水平。

更大抗性是指由除草剂减小变异体的催化活性，要比由除草剂降低野生型HPPD催化活性时达到更小的程度。优选的有更大抗性的变异体HPPD保留为维持细胞、植物或生物体(其中加有同样浓度的同样除草剂)的存活性所需的足够催化活性，而野生型HPPD则不会保留为维持细胞、植物或生物体的存活性所需的足够催化活性。

在没有除草剂时，优选的催化活性至少为没有除草剂时野生型HPPD催化活性的至少约5％，最好约大于20％。

对于三酮抗性变异体HPPD来说，HPPD变异体蛋白质最好具有(ⅰ)在没有所说的除草剂时，约大于所说的野生型HPPD之催化活性的20％以上的催化活性；(ⅱ)与野生型HPPD相比对三酮除草剂表现有更大抗性的催化活性。

35.根瘤农杆菌与植物细胞的化学分子内共生原理1损伤植物细胞产生酚类物质，作为农杆菌的侵染信号2这些化学诱导物通过农杆菌的细胞膜活化毒区a和毒区g基因，诱导毒区的其它基因3毒区基因的活化作用于t-dna的加工和t-dna的转移4.t-dna进入植物细胞后，整合到植物核dna上5.t-dna在植物细胞中表达，产生冠瘿碱及植物激素6.农杆菌ti质粒上有转移型冠瘿碱分解酶基因，该基因启动合成各种酶，分解植物细胞产生的冠瘿碱作为唯一的碳源和氮源7.冠瘿碱促进农杆菌的附着，有利于ti质粒的结合转移，扩大侵染范围。采用国外进口原料和技术精工合成，内含豆类专用基因调控剂、抗病诱导剂、多种营养元素、细胞激动素、植物增产因子。若想用基因工程并通过土壤农杆菌向某种植物中导入抗旱基因，以下分析不合理的是()a．若用ti质粒作为抗旱基因的载体，要保证复制原点和用于转移t－dna的基因片段不被破坏b．农杆菌转化法自然条件下用于将目的基因导入双子叶植物和裸子植物c．用含有重组ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，可以通过植物组织培养技术培育出具有抗旱基因的植物d．若能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，则说明该基因工程项目获得成功18．北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。

变异体HPPD多肽在转基因植物中的表达赋予植物以抗除草剂，如硫康三酮等三酮类除草剂的高水平抗性，从而得以在培养转基因植物期间使用这些除草剂。

将外来基因导入植物中的方法是本领域已知的。这些方法的非限制性实例包括土壤杆菌感染、颗粒轰击、聚乙二醇(PEG)处理原生质体、原生质体电穿孔、微量注射、大量注射、分蘖注射、花粉管途径导入、干种子吸涨、激光穿孔及电泳(例如参见B.Jenes等人，和S.W.Ritchie等人，摘自转基因植物(Trnsgenic Plants),Vol.1,基因工程及其利用(Engineering and Utilization)，编者S.-D.Kung,R Wu,Academic Press,Inc.,Harcourt Brace Jovanovich 1993；和L.Mannonen等人，生物技术的评价性综述(Critical Reviews inBiotechnology),14:287-310,1994)。

在一优选实施方案中，将编码变异体HPPD的DNA克隆到含有抗生素抗性标志基因的DNA载体中，并将含有重组HPPD DNA的质粒导入含有Ti质粒的根瘤土壤杆菌中。例如美国专利No.4,490,838中和An等人，植物分子生物学手册(Plant Mol.Biol.Manual)A3:1-19(1988)中描述了这种“双重载体系统”。然后将被转化的土壤杆菌与受体植物的叶盘共培养，以感染和转染植物细胞。然后在促进茎干形成的再生培养基中，首先于便于选择被转化的细胞的适当抗生素存在下，然后于除草剂存在下培养被转化的植物细胞。在用编码除草剂抗性HPPD的DNA成功地转化的植物细胞中，甚至在抑制未被转化的细胞再生之植物的茎干形成浓度的除草剂存在下，也可见茎干形成。例如用聚合酶链反应(PCR)分析证实变异体HPPD DNA的存在后，试验被转化的植物耐受除草剂喷雾的能力，和它们在除草剂存在下的种子发芽、根发生及增殖的能力。

改用无水 k co 作缚酸剂, 加热回流 5 h 左右原 的除草活性均显著降低或消失, 这与文献[12, 20]关于 2 3料点基本消失, 反应时间明显缩短, 但是产物非常复杂 这类化合物除草活性的构效关系并不完全吻合, 其原因导致收率不高, 可能是部分含 2,4-咪唑啉二酮杂环中间 有待进一步探讨。由振国博士说，作为膦酸类灭生性除草剂，保试达的有效成分草铵膦为植物谷氨酰胺合成抑制剂，以植物绿色茎叶接触吸收为主，内吸作用和木质部传导十分有限，无土壤除草活性。更值得一提的，单方精油全部来自全球最佳产地的最佳有机农场的最佳有机土壤，然后经过最佳萃取方式获得，还有一点，基础油除了继承上述品质之外，全部经过有机处理，不管是不是有机的基础油，全都经过有机处理，也就是说，活性成分能得到最好的保存，这里说一下，有些精油不是有机的并不能说不好，全球有机精油大概只有20种左右，而其他精油的原有植物，野生的更利于生长，这个意思。

可将除草剂抗性HPPD基因以单或多拷贝转化到作物中以提供除草剂抗性。

对具有降低的除草剂敏感性的作物物种进行遗传工程，可以(1)提高特别有效的和环境上无害的除草剂的除草谱及应用的灵活度；(2)提高这些除草剂的商业价值；(3)对除草剂抗性作物物种有效地使用除草剂以降低农田中的杂草压力并相应的增加收获产量；(4)提高除草剂抗性植物的种子销售额；(5)提高对因为以前播种时施用的除草剂的存留而造成的作物损害的抗性；(6)减少对由于不良气候条件造成的除草剂特性改变的敏感性；(7)提高对不均匀地或错施的除草剂的耐受性。

例如，可以栽培含有转基因HPPD变异蛋白质的植物。可以用控制杂草有效量的，HPPD变异体转基因植物对其有抗性的除草剂处理作物，从而在对栽培的作物没有有害影响的情况下控制农田中的杂草。