滇桂艾纳香石油醚部位化学成分及挥发性成分的分析-analysis of chemical constituents an(2)

除另有规定外，用水对仪器进行校准，并把水作为第一份样品进行测定，仪器将给出水的颜色值，接着依次取按各品种项下规定的方法配制的供试品溶液和标准比色液，分别进行测定，仪器不仅可测出两种溶液的颜色值，还给出供试品溶液和标准比色液分别对水的色差值（Δe），如供试品溶液与水的色差值不超过标准比色液与水的色差值，则判定为符合规定，反之则判定为不符合规定。检查时，将装在供试品的纳氏比色管内的溶液呈现的颜色和装在纳氏比色管内的标准比色液呈现的相同或接近的颜色同置白色背景上，自上向下用肉眼透视观察或同置白色背景前用肉眼平视观察检查，以供试品溶液与标准比色液进行比较，其比较的结果，供试品溶液的颜色不得比规定标准比色液的颜色更深。【分析】x能和hcl反应生成气体甲，隔绝空气加热x得到气体甲和固体1，且x和hcl（aq）反应也能得到甲，因此猜测x是碳酸盐，因为x加热易分解且能和酸反应生成co2，那么甲为co2，固体1溶于水得到溶液1和固体2，溶液1和二氧化碳反应生成白色沉淀1，白色沉淀1和二氧化碳、水反应生成溶液2，则白色沉淀1为碳酸盐、溶液2为碳酸氢盐。

结果见表1-2。表1-2滇桂艾纳香乙醇提取液化学鉴别试验结果检查项目试液或反应名称正反应(+)指标实验现象结论百色龙州盐酸-镁粉反应呈红色红色++++黄酮类蒽醌类酚类香豆素与内酯强心苷甾体或三萜类三氯化铝试液荧光应变黄或加深荧光变黄++氨熏试验应显黄色荧光黄色荧光++碱性试验加碱变红色，加酸成颜色无变化--醋酸镁试验呈红色颜色无变化--三氯化铁试验应呈绿、蓝或暗紫色深绿色+++氯化钠明胶试验白色沉淀或浑浊产生浑浊++异羟肟酸铁试验呈紫色紫色++偶合反应呈红色或紫色紫色+++荧光试验绿、蓝色荧光淡蓝色荧光++3，5-二硝基苯甲酸试呈红色或紫色颜色无变化--亚硝酰铁氰化钠试液显红色，红色逐渐消颜色无变化--碱性苦味酸试验呈红色或橙色颜色无变化--醋酐-浓硫酸试验黄→红→紫青→污无颜色变化过程，--氯仿-浓硫酸试验氯仿层显红或青色，氯仿层有黄绿色荧--生物碱碘化汞钾试液白色或淡黄色沉淀无沉淀--碘化铋钾试液淡黄色或棕色沉淀无沉淀--硅钨酸试液淡黄色或白色沉淀无沉淀--“+”示有此反应；“++”示此反应显著；“-”示无此反应2.3石油醚供试液制备取滇桂艾纳香药材粗粉1g，加10ml石油醚(60～90℃)，浸泡3小时，过滤，即得石油醚供试液。

结果见表1-3。表1-3滇桂艾纳香石油醚提取液化学鉴别试验结果检查项目试液或反应名称正反应(+)指标实验现象结论百色龙州挥发油油斑检查加热滤纸油斑消失加热油斑消失++油脂油斑检查Libermann-Berchard滤纸上有油斑，且不消失无油斑--反应甾体或三萜类紫红--污绿紫红--污绿++氯仿层显红色，氯仿层显红色，硫酸氯仿-浓硫酸反应层有绿色荧光硫酸层有绿色++荧光“+”示有此反应；“++”示此反应显著；“-”示无此反应2.4预实验小结a.从以上化学反应鉴别结果表明，滇桂艾纳香可能含有多肽、还原糖、多糖、苷类、皂苷、鞣质、有机酸、黄酮类、酚类、香豆素、内酯等化学成分。b.石油醚提取液预实验表明，石油醚部位可能含有甾体或三萜类成分，为下一步石油醚部位的化学成分提取分离提供依据。第二部分滇桂艾纳香石油醚部位质量分析研究1紫外可见光谱鉴别近年来紫外光谱作为中药鉴别的手段发展得越来越快，对某些中药及其化学成分来说，紫外吸收光谱在一定程度上也反映了中药中化学成分的差异，可做为定性鉴别的辅助依据。1.1方法与结果取滇桂艾纳香石油醚提取部位1g（提取过程见第一部分1.4），加入石油醚（沸点：60～90℃）10mL。

超声溶解，取出，滤过，取1mL滤液加入石油醚至50mL。以石油醚（60～90℃）作空白对照，在200～800nm波长范围内进行零阶、一阶、二阶导数光谱扫描。结果如表2-1和图2-1～2-4。表2-1滇桂艾纳香石油醚提取部位紫外-可见光谱的吸收峰位峰位（nm）谷位（nm）零阶谱201，219，401812，831，825一阶谱二阶谱484，655，706583，654，658625，657，766485，581，656三阶谱582石油醚部位，653，657484，580，6550.042190.02Absorbance(AU)3490610-0.02-0.04-0.06200300400500600700图2-1滇桂艾纳香石油醚提取部位零阶紫外-可见光谱图Wavelength(nm)6550.030.024847060.01d1(Absorbance)2056250657-0.01-0.02-0.03-0.04200300400500600700800900图2-2滇桂艾纳香石油醚提取部位一阶紫外-可见光谱图Wavelength(nm)6563570.030.025820.01d3(Absorbance)4845800-0.01655-0.02-0.03-0.04-0.05200300400500600700800900图2-3滇桂艾纳香石油醚提取部位二阶紫外-可见光谱图Wavelength(nm)6563570.030.025820.01d3(Absorbance)4845800-0.01655-0.02-0.03-0.04-0.05200300400500600700800900图2-4滇桂艾纳香石油醚提取部位三阶紫外-可见光谱图Wavelength(nm)1.2讨论与小结滇桂艾纳香石油醚提取部位在紫外-可见光区有吸收峰，但是其吸收均较弱，其中在石油醚部位零阶光谱图中，在201nm，219nm，401nm波长处有明显的吸收，其中201nm为最大吸收峰。

7. 光谱纯的溴化钾（kbr）粉： 溴化钾（kbr）是红外（ftir）样品的载体。当具备连续波长的光谱激发材料，样品中某个基团的波谱频率和光谱频率一样时，某个基团就获得能量由基态跃迁到能量较高的振(转)动能级，红外光此时被物质吸收，将分子红外光谱变化的状况用接受仪器保存下来，就得到红外光谱图，判断物质成分。主要包括了药物的命名，理化常数研究，样品的制备，样品的测试，常用的分析测试方法有紫外可见吸收光谱（简称：紫外光谱）（ultraviolet-visible absorption spectra ，uv）、红外吸收光谱（infrared absorption spectrum，ir）、核磁共振谱（nuclear magnetic resonance，nmr）、质谱（mass spectrum，ms）、比旋度（[&alpha。

结果见下图2-5。100959085807570%Transmittance651710.6460974.205550451465.414035302919.3252850.9720154000350030002500200015001000500Wavenumbers(cm-1)图2-5滇桂艾纳香石油醚提取部位红外光谱图从红外图谱中可以得知，滇桂艾纳香石油醚提取部位含有相应的特征吸收峰有：2919.32cm-1，2850.97cm-1，3444.71cm-1，3611.52cm-1，2349.77cm-1，1710.64cm-1，1465.41cm-1，1667.33cm-1，1377.03cm-1，1794.13cm-1，1315.80cm-1，1271.35cm-1，1178.86cm-1，974.20cm-1，723.00cm-1。以上红外特征峰为进一步研究滇桂艾纳香石油醚部位质量及部位化学成分提供了参考依据。3TLC鉴别薄层色谱法是一种微量、快速、简便的色谱方法，被广泛应用于药用植物的成分分析中，并作为植物药鉴别方法被世界上多数药典收录，作为鉴别的基本手段。本实验通过对滇桂艾纳香石油醚部位提取液薄层色谱分析研究，为分离分析石油醚部位化学成分奠定基础。

3.4 硫酸钠（无水） 3.5 硫酸溶液（1+3） 3.6 标准油：取含油水样若干升，加脱芳香烃石油醚或乙醚抽提（按 1l 水样加入 25 ——30ml） ，将抽提液用无水硫酸钠脱水，并过滤于蒸馏瓶中，蒸馏回收大部分石油 醚或乙醚，将剩余少量抽提液转入已恒重的蒸发皿中，并用 10——20ml 石油醚或乙 醚洗涤蒸馏瓶， 洗涤液也一并转入蒸发皿中， 移至 70℃水浴上将其蒸干后， 放入 70℃ 烘箱烘至恒重，以此油为标准油。16.只用一种试剂就可以鉴别乙酸溶液、葡萄糖溶液、蔗糖溶液，这种试剂是( )。产生大量气泡的是乙酸，不溶，出现分层的的乙酸乙酯，故鉴别乙醇、乙酸和乙酸乙酯：用碳酸钠溶液，正确。

本实验通过对石油醚部位薄层分析研究为滇桂艾纳香石油醚提取部位质量分析及成分分析提供了科学依据。4GC-MS联用法分离分析滇桂艾纳香石油醚部位化学成分为初步了解滇桂艾纳香石油醚部位所含化学成分，本实验用GC-MS联用法对滇桂艾纳香石油醚部位及石油醚组分进行分离分析。4.1样品的制备4.1.1石油醚部位样品的制备取石油醚浸膏（提取详见第一部分1.4）1.0g充分溶解于10mL重蒸乙醚中，离心，取上清液加少量无水硫酸钠脱水，再次离心后，即得石油醚部位样品。4.1.2石油醚部位组分的分离（见第三部分石油醚组分的柱层析分离-组分A和组分B的分离部分）4.2气相色谱-质谱联用分析条件GC条件：色谱柱HP-5MS(5%PhenylMethylSiloxane,30m×0.25mm×0.25μm)弹性石英毛细管柱。进样口温度：250℃，载气：He；流速：1ml/min。MS条件：电离方式：EI；离子源温度；230℃；电子能量：70Ev;发射电流：0.25mA;质量分析器：四级杆，温度250℃；质量扫描范围：30～500amu；美国NIST02谱库检索。4.3石油醚部位化学成分的升温程序4.3.1滇桂艾纳香石油醚部位提取物的升温程序取1μl样品注入仪器，分流比split为6:1，升温过程为：起始温度为120oC，以8oC/min升温至140oC（保持1min），以4oC/min升温至200oC（保持2min），以4oC/min升温至230oC（保持2min），以5oC/min升温至250oC（保持2min）。

4.3.2滇桂艾纳香石油醚部位柱层析分离组分的升温程序流份A的升温程序取1μl样品注入仪器，分流比split为10:1，升温过程为：起始温度为60oC（保持3min），以8oC/min升温至100oC（保持3min），以5oC/min升温至150oC（保持1min），以3oC/min升温至200oC（保持2min），以3oC/min升温至230oC（保持2min）。流份B的升温程序取1μl样品注入仪器，不分流分析，升温过程为：起始温度为100oC，以8oC/min升温至150oC（保持0min），以2oC/min升温至160oC（保持1min），以8oC/min升温至190oC（保持2min），以5oC/min升温至230oC（保持2min）。4.4样品分析经气相色谱分离分析得到的组分，用面积归一化法测定各组分的百分含量，并检测成分的GC-MS总离子流色谱，所得的色谱图用美国NIST02谱库检索，并按各峰的质谱裂片图与文献资料核对。4.5结果按上述测定条件进行GC-MS分析测定，所得的色谱（见图2-7至图2-9）和质谱信息经数据处理系统与其内存谱库（Nist02.1和Wiley275.L）自动检索和人工检索与解析，筛选与谱库中相似度大于80%的物质，鉴定滇桂艾纳香石油醚部位的各化学成分。

化合物相对含量的确定为面积归一化法。鉴定出12个化合物，占总化合物的82.3%，已鉴定的12个化合物的分析结果见表2-2。从流份A分离分析鉴定了7个化合物（占总化合物质量的94.51％），分析和鉴定结果见表2-3。从流份B分离分析鉴定了4个化合物（占流份总质量的89.37％），分析和鉴定结果见表2-4。AbundanceTIC:LIUXH8.D260000024000002200000200000018000001600000140000012000001000000800000600000400000200000Time-->5.0010.0015.0020.0025.0030.00图2-7滇桂艾纳香石油醚部位提取物的总离子色谱Abundance750000TIC:09071603.D70000065000060000055000050000045000040000035000030000025000020000015000010000050000Time-->5.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.00图2-8石油醚部位流份A的总离子色谱AbundanceTIC:09071702.D50000045000040000035000030000025000020000015000010000050000Time-->4.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.00图2-9石油醚部位流份A的总离子色谱表2-2滇桂艾纳香石油醚部位GC-MS鉴定表峰号分子式分子量名称保留时间(min)百分含量(%)1C15H24O220斯巴醇(-)-Spathulenol7.950.912C14H18N4298[4aR-(4a,5a,8a)]-4,4a,5,6,7,8-六氢-5-甲基-8-（1-甲乙基）-2(3H)-萘10.190.832(3H)-Naphthalenone,4,4a,5,6,7,8-hexahydro-5-methyl-8-(1-methylethyl)-,[4aR-(4a.alpha.,5.alpha.,8.alpha.)]-(CAS)3C18H36O2686,10,14-三甲基-2-十五烷酮2-Pentadecanone,6,10,14-trimethyl-13.596.144C16H22O4374邻苯二甲酸二异丁酯1,2-Benzenedicarboxylicacid,14.152.2bis(2-methylpropyl)ester5C14H28O22842,8-二甲基-十一酸甲酯Undecanoicacid,2,8-dimethyl-,methylester14.730.536C16H22O4374邻苯二甲酸二丁酯Dibutylphthalate16.322.847C16H32O2352n-棕榈酸n-Hexadecanoicacid16.592.128C18H36O2284棕榈酸乙酯Hexadecanoicacid,ethylester17.0948.59C19H38O2298十七烷酸乙酯Heptadecanoicacid,ethylester19.335.9110C20H40O2312硬脂酸乙酯Octadecanoicacid,ethylester22.017.9211C21H40O23244,8,12,16-四甲基十七烷-4-内酯25.850.934,8,12,16-Tetramethylheptadecan-4-olide12C17H34O2366十五烷酸乙酯Pentadecanoicacid,ethylester31.633.46表2-3石油醚部位流份A成分鉴定表峰号分子式分子量名称保留时百分含间(min)量(%)1C15H24O220[1-(1α,4α,7β,7aβ,7bα)]-十氢-1,1,7-三甲基-4-次甲基-1H-19.153.86环丙烷[e]-薁基-7-醇1H-Cycloprop[e]azulen-7-ol,decahydro-1,1,7-trimethyl-4-methylene-,[1ar-(1a.alpha.,4a.alpha.,7.beta.,7a.beta.,7b.alpha.)]-2C14H18N4298[4aR-(4a,5a,8a)]-4,4a,5,6,7,8-六氢-5-甲基-8-（1-甲乙基）-2(3H)-萘2(3H)-Naphthalenone,4,4a,5,6,7,8-hexahydro-5-methyl-8-(1-methylethyl)-,[4aR-(4a.alpha.,5.alpha.,8.alpha.)]-1.083C16H32O2352棕榈酸n-Hexadecanoicacid31.2159.524C20H40O296植物醇Phytol35.2121.765C18H32O2280亚油酸Linoleicacid35.952.136C18H34O2282油酸OleicAcid36.192.747C18H36O2284硬脂酸Octadecanoicacid36.911.94表2-4石油醚部位流份B成分鉴定表峰号分子式分子量名称保留时百分含间(min)量(%)1C15H24204[1-(1α,4α,7β,7aβ,7bα)]-十氢-1,1,7-三甲基-4-次甲基-1H-6.931.76环丙烷[e]-薁基-7-醇1H-Cycloprop[e]azulene,decahydro-1,1,7-trimethyl-4-methylene-,[1aR-(1a.alpha.,4a.beta.,7.alpha.,7a.beta.,7b.alpha.)]-2C16H32O2352棕榈酸n-Hexadecanoicacid14.7782.133C20H40O296植物醇Phytol17.832.444C18H32O2280(Z,Z)-9,12-十八烷二烯酸9,12-Octadecadienoicacid(Z,Z)-18.473.554.6讨论与小结滇桂艾纳香石油醚部位已鉴定的12个化合物占挥发油成分总量的82.3%。