荧光检测器原理_荧光探针如何检测_荧光原位杂交技术联合免疫组织化学检测

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荧光检测器(Fluorescence Detector,简称FLD)是高压液相色谱仪常用的一种检测器。用紫外线照射色谱馏分，当试样组分具有荧光性能时，即可检出。

中文名

荧光检测器

外文名

Fluorescence Detector

简称

FLD

类型

高压液相色谱仪常用的一种检测器

拼音

yingguangjianceqi

特点

选择性高、灵敏度高等

选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，最低检出限可达10-12ug/ml，适合于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析。也可用于检测不发荧光但经化学反应后可发荧光的物质。如在酚类分析中，多数酚类不发荧光，为此先经处理使其变为荧光物质，而后进行分析。

化合物受紫外光激发后，发射出比激发光波长更长的光，称为荧光；

荧光强度下降的比率为(i-ici)atl xioo %，itl代表只加缓冲溶液的空白对照荧光发射峰处荧光强度，i代表加入不同浓度胰蛋白酶后发射峰处荧光强度。而红移主要是由含烷氧基的羰基、羟基、取代基、氨基及羧基等官能团的出现引起. 从本研究结果来看，臭氧氧化使大分子物质转化变为小分子物质，将稠环芳烃的多环结构及共轭双键破坏，导致了峰2的蓝移和荧光峰强度的降低. 还有一部分分子结构中羰基、羧基等官能团的含量增加，表现为荧光峰1的红移. 前期研究表明原水中主要有机物为苯系物、卤代烃和一些杂环物质，其中含不饱和键的物质占80%以上，经过臭氧预氧化后检测水中含主要有机物为烷烃、酯类、羧酸和醛类物质[]. 曝气生物滤池出水荧光强度有所提高是因为滤池中的生化反应产生微生物次生代谢产物等物质所致.。为373nm处的荧光强度)、厶(波长a，为384nm处的荧光强度)、荧光检测器原理，1／，3值、芘的第一荧光峰处a，和第三荧光峰处a，分别随c(ctab)变化的曲线都有突变点，且5个突变点处的c(ctab)均为0．80mmol／l，故可以确定ctab的临界胶束浓度(cmc)为0．80mmol／l。

Q为量子产率，K为荧光效率，ε为摩尔吸光系数，l为光径长度。

从电子跃迁的角度来讲，荧光是指某些物质吸收了与它本身特征频率相同的光线以后，原子中的某些电子从基态中的最低振动能级跃迁到较高的某些振动能级。电子在同类分子或其他分子中撞击，消耗了相当的能量，从而下降到第一电子激发态中的最低振动能级，能量的这种转移形式称为无辐射跃迁。由最低振动能级下降到基态中的某些不同能级，同时发出比原来吸收的频率低、波长长的一种光，就是荧光。被化合物吸收的光称为激发光，产生的荧光称为发射光。荧光的波长总要长于分子吸收的紫外光波长，通常在可见光范围内。荧光的性质与分子结构有密切关系，不同结构的分子被激发后，并不是都能发射荧光。

在光致发光中，发射出的辐射总依赖于所吸收的辐射量。由于一个受激发的分子回到基态时可能以无辐射跃迁的形式产生能量损失，因而发射辐射的光子数通常都少于吸收辐射的光子数，它以量子效率Q来表示。

步骤iv得到的检测液中在37°c下培养15分钟，将胰蛋白酶溶解于浓度为10 mm, ph8. 0的磷酸盐缓冲溶液中，在检测液中分别加入相同体积不同浓度的胰蛋白酶，以加入缓冲溶液作为空白对照，浓度范围从0. 01到100呢ml—1，在37°c下进行荧光光谱跟踪检测，以荧光发射峰强度下降的比率对时间作图，得到不同浓度胰蛋白酶催化水解条件下荧光发射峰强度线性下降的时间范围。 ii测定表面活性剂的临界胶束浓度cmc: 将表面活性剂溶解于浓度为10 mm,ph 8. 0的磷酸盐缓冲溶液中，配制浓度范围为imoll—卜ktmol l—1的梯度溶液，用微量进样器移取步骤i配制的荧光探针有机溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中探针的终浓度为10_8 10_6 mo i l—1，以4(tl00khz敞口超声波处理10^60分钟，静置0. 5^12小时后进行荧光光谱检测，测定表面活性剂的临界胶束浓度cmc 。将表面活性剂溶解于浓度为10 mm,ph 8. 0的磷酸盐缓冲溶液中，配制浓度范围为imoll—卜ktmol l—1的梯度溶液，用微量进样器移取步骤i配制的荧光探针有机溶液，加入到梯 度溶液中，使梯度溶液中探针的终浓度为10_8 10_6 mo i l—1，以4(tl00khz敞口超声波处理1(t60分钟，静置0. 5^12小时后进行荧光光谱检测，测定表面活性剂的临界胶束浓度cmc 。

荧光涉及光的吸收和发射两个过程，因此任何荧光化合物，都有两种特征的光谱：激发光谱(excitation spectrum)和发射光谱(emission spectrum)。

原子荧光光谱是基于基态原子吸收特定波长光辐射的能量而被激发至高能态，受激原子在去激发过程中发射出的一定波长的光辐射，根据这一原理制成的可以检测元素含量的仪器叫原子荧光光谱仪（光度计），比如sk-2003a,线性宽度大于三个数量级，重复性小于百分之0.6%。但有一点要注意，不同波长的激发光照射样品，得到的拉曼相近，但荧光可以有很大不同，甚至相同波长不同功率激发，荧光谱都大不一样。当标记为荧光标记时，可以通过用适当波长的光激发荧光染料并检测所获得的荧光而对荧光标记进行检测。

一般所说的荧光光谱，实际上仅指荧光发射光谱。它是在激发单色器波长固定时，发射单色器进行波长扫描所得的荧光强度随荧光波长(即发射波长，Em)变化的曲线。荧光光谱可供鉴别荧光物质，并作为荧光测定时选择合适的测定波长的依据。

另外，由于荧光测量仪器的特性，使光源的能量分布、单色器的透射率和检测器的响应等性能会随波长而变，所以同一化合物在不同的仪器上会得到不同的光谱图，且彼此间无类比性，这种光谱称为表观光谱。要使同一化合物在不同的仪器上能得到具有相同特性的荧光光谱，则需要对仪器的上述特性进行校正。经过校正的光谱称为真正的荧光光谱。

当标记为荧光标记时荧光检测器原理，可以通过用适当波长的光激发荧光染料并检测所获得的荧光而对荧光标记进行检测。由于斯托克斯（stokes）位移——物质被光激发后，产生的电子跃迁（荧光）中，其吸收谱和发射谱峰值间的波长差或频率差，光束重新发射的荧光波长大于原激发光的波长。三十六、求助拉曼光谱选择扫描范围和激发波长，我作了个样，用拉曼光谱表征，物质为硅胶负载有机物（对甲苯磺酸盐类），但好像荧光比较明显，干扰大，检测老师叫我提供扫描范围和激发波长。

参考资料