β胡萝卜素氧化降解产物及其生理活性研究.pdf(4)

3．3．3B一胡萝I-素氧化降解产物的分离江南大学硕士学位论文 O．63、0．70。图3-3B一胡萝}素薄层分离Fig．3-3Separationof[g-carotenedegradationproducts刮下前三个条带A，B，C进行波长扫描后(图3．4)，A、B、C这三个化合nm、400姗、420nm。 的最大吸收波长分别为370蜘和如∞娜锄鲫m(A)28第三章B一胡萝p素的氧化降解2鼍D习Eoa∞毫阳●∞与船。芒瑟船m∞)期湖鞠嘲栅卸锄m(C)图3．4氧化降解产物分离组分A、B、C紫外可见光谱3-4UV／visandoxidationandCFigspectrumof[，-carotenedegradation productA，B 3．3．413一胡萝b素降解产物的分离与检测利用薄层层析对B一胡萝h素氧化降解产物进行分离后，并通过高效液相检测可以确定 分离得到的物质基本上是比较纯的(图3-5)。 20 10S0(a) mAU3．632．521．61o．6o(b)第三章B一胡萝h素的氧化降解AU3532521 5105O2．55mirn，(c) 图3-5HPLC ofB—c缸00e∞andfracliollA、B、CFig．3·5analysis (色谱条件：检测器：二极管阵列检测器(DAD)；色谱柱：HEWLETYZORBxSBC18柱；min， TI=10 A=o％，B=100％；T2=15min，A卸％，B=100％。

这显示Ｂ．胡萝ｈ素氧化降解产物对癌细胞。对ｐ一胡萝ｈ素进行控制型氧化后，对Ｂ一胡萝ｈ素和ｐ一胡萝ｂ素氧化降 解产物进行高效液相检测（图３－１），以同浓度的８一胡萝卜素作为外标，检测其 氧化发现试验４其氧化降解产物中Ｂ一胡萝ｈ素含量Ｏ．５１％，可认为是完全控制 型氧化，氧化降解产物所具有的各种作用来自于反应产物，而不是Ｂ一胡萝卜素。第四章Ｂ一胡萝ｈ素氧化降解产物生理活性研究。

Ｂｅｒｔｒａｍ 等首次提出并证明有关６一胡萝ｈ素与转化为类视黄醇及抗氧化机制无关的抗癌 作用机制【３６，３７］，即Ｂ一胡萝卜素能增强细胞间隙连接通讯，抑制细胞的恶性转化。１．胡兴娟，张连富，王晓岚，谷文英．ｐ一胡萝ｈ素氧化降解产物及其抑制癌 细胞活性研究，食品生物技术，录用． ２．张连富，胡兴娟．Ｂ一胡萝卜素氧化降解及产物对ＳＧＣ一７９０１细胞的抑制作用， 天然产物研究与开发，录用．。因为它的细胞会分泌一种物质，这种物质不仅能抑制癌物质，而且还能使癌物质逆转。

目前，大剂量增补B．胡萝卜素对于重度吸烟者和在石棉粉尘中工作的人员的 研究表明增加D．胡萝p素的摄入量非但不能降低、相反却会增加受试者患肺癌的 危险m”】。由于吸烟者肺中自由基的浓度大大高于非吸烟者，争胡萝h素又易于 被自由基氧化而产生二级代谢产物，因而可能这些二级代谢产物造成了受试者患J．Handehllan[75】、WemerG 肺癌危险的增加。CarrySiems[TM等的研究小组研究了B- 胡萝卜素在不同条件下的降解反应并发现其降解产物中的某些成份会抑制 Na+·K+-ATPase酶活性并表现出毒性，这与上述研究结论相吻合。因此本章以B．胡萝h素次级代谢产物为研究目标，用特定肿瘤细胞的抑制／ 增殖试验(MTT试验)，对肛胡萝卜素在相对温和条件下的不完全氧化方法进行 筛选，并对其不完全氧化降解产物进行分离、纯化，从中找出具有生物活性的组江南大学硕士学位论文 分，解释类胡萝h素物质可能的代谢途径。 4．2试验材料与方法 4．2．1实验试帮 B．胡萝p素样品，Fluka公司； 乙腈，甲醇为色谱纯； 四氧化锇(Os04，>99％)，LancasterSynthesis公司； 超级新生小牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司； 谷氨酰胺(进口分装)，购于中国医药上海化学试剂公司； RPMI一1640培养基，Gibco公司； 二甲亚砜，Merck公司。

4．2．2细胞系 L02：人正常肝细胞，培养条件为10％新生小牛血清，RPMI--1640，在37℃、 5％C02培养箱中培养。由江南大学生物工程学院提供。 37℃、5％C02培养箱中培养。由江南大学生物工程学院提供。 5％C02培养箱中培养。由江南大学生物工程学院提供。 ％C02培养箱中培养。由复旦大学医学院免疫系馈赠。 4．2．3仪器设备 C02培养箱Harris公司 UV--2102PCS型紫外可见分光光度计 尤尼克上海仪器有限公司 HettichEBA20离心机德国Hettich公司 THERMO MulfiskanLabsystemsMK3酶联芬兰ThermoLabsystems公司 免疫检测仪 XK96型微型振荡器江苏姜堰市新康仪器厂 SW二CT-Ⅲ超净台