载体和质粒的区别_质粒载体的特点_载体质粒图谱

必备条件

①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。

一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割dna分子（例如，从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别gaattc序列，并在g和a之间将这段序列切开）。目前已经发现了200多种限制酶，它们的切点各不相同。d．作为运载体要有多种限制酶的切点，但对一种限制酶而言，最好只有一个切点。

③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失。

1.是唯一可以进行长期研究的方法.双链rna只能短暂抑制哺乳动物细胞的基因表达,而具有发卡结构的双链rna能够增加阻断基因表达的时间.在小鼠畸胎瘤细胞,胚胎干细胞,c2c12细胞中,用长链具有发卡结构的双链rna有效的阻断了报告基因的表达,在稳定表达具有发卡结构的双链rna的细胞株中,报告基因的表达被长期的阻断了.带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达,持续数星期甚至更久.即使是对转染带有筛选标记质粒的细胞进行瞬时筛选,也有助于富集带质粒的细胞.这也可以帮助解决一些难转染的细胞由于转染效率低造成的问题.。当serb基因和serc基因位于分开的载体上以导入棒杆菌时，优选使用两个具有互不相同的各自的标记基因的载体。1.2.1 酵母双杂交载体的构建: 利用pcr扩增的方法从成人肝cdna文库中获得hpo205和cytc编码基因的dna序列, 通过相应限制性内切酶酶切后, 与同样酶切后的含dna结合结构域(dna binding domain, db)的pdbleu空载体和含转录激活结构域(activation domain, ad)的ppc86空载体连接, 连接产物转化e.coli. jm109感受态, 相应抗性筛选(pdbleu: 卡那抗性。

⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。

基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体。

载体分类

质粒载体

质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。

噬菌体载体

利用噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。

病毒载体

人体的生殖器官部位温度较于正常的体温载体和质粒的区别，极其容易滋生细菌，一旦受尖锐湿疣病毒感染后，病毒透过皮肤或粘膜的鳞状上皮细胞，在细胞核内进行大量繁殖，产生大量成熟的病毒颗粒，引起异常的细胞增生，从而表现力湿疣病变。免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。 因为它们有光合色素藻蓝素和叶绿素 原核生物 放线菌 支原体 衣原体 生 物 体 非细胞生物: 细胞 生物 病毒 原核 生物 真核 细胞 放线菌：链霉菌 动物：变形虫 蓝藻：念珠藻，颤藻，发菜 蓝球藻 细菌：乳酸杆菌，醋酸杆菌，葡萄球菌 支原体：最小的细胞，没有细胞壁 衣原体： 真菌：酵母菌、青霉菌，曲霉菌、蘑菇 植物：衣藻，团藻 思考：。

当前人们还在不断寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体DNA也有可能成为运载体。

实际运用

42.直接转化法：需要用到细菌超螺旋质粒如pbr322然后插入合适筛选标记和被克隆λ基因，质粒dna随机整合到植物染色体的任何地方。但我们可以通过载体改造去除一些不必要基因，在一些特殊情况下，可以最大插入4kb的基因片段。人体细胞信号通路的一个蛋白基因mkk6，片段长度1800bp载体和质粒的区别，要在体细胞中过表达，想选用pgenesil-1质粒载体，但不知道应该加在那个启动子后面，这个载体不知道能不能用，多谢了。