pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具.如图Ⅰ所示. I

在dna重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。6.质粒的基本特性 1质粒是细菌细胞中独立存在的一种环状dna分子2几乎所有的质粒都带有一个或多个基因，而且这些基因的表达带之宿主细胞一些有用的特征。②重组载体的构建：质粒是常用的运载体，科学家在进行上述操作时，要用同一种______分别割质粒和目的基因。

（1）建构基因表达载体时，必须有 、复制原点、目的基因、终止子以及 。

（2）构建人工质粒时要有抗性基因，以便于 。

（3）pBR322分子中有单个EcoRI限制酶作用位点，EcoRl只能识别序列—GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRl的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端 。

（4）pBR322分子中另有单个的BamHI限制酶作用位点，现将经BamHI处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过DNA连接酶作用恢复 ，成功获得了重组质粒。说明 。

（5）为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落；再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图三的结果（空圈表示与图二对照无菌落的位置）。与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是 。图三结果显示，多数大肠杆菌导入的是 。

5）如图20所示，单击主菜单的“编译”（build），在其下拉菜单中选择“构建example1.exe”（build example1.exe），或者单击工具栏上的“构建”按钮。图4.6 固定电压操作模式之应用固定功率模式(c.p. mode)的应用主要应用为电池容量寿命测试目前市面上手提型的电子设备都必须使用一次或二次电池，而电池使用时，其输出电压会随使用的时间及功率而逐渐下降，如(图4.7a 所示)，其输出电流则随时间上升(如图4.7b 所示)，以维持输出的功率容量于一定的水准(如图4.7c 所示)。纤通讯中信号传播的主要载体是光导纤维，它的结构如图9所示，其内芯和外套材料不同，光在内芯中传播．下列关于光导纤维的说法中正确的是()．。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于。

(2)pBR322分子中有单个EcoR I限制酶作用位点，EcoR 1只能识别序列一GAATTC一，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoR I的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoR I切割后所形成的黏性末端。

40.构建基因组文库的基因步骤1纯化全细胞dna.2部分限制性酶切的到适当大小的片段3插入到合适的载体上构建重组dna分子4重组dna分子经转化进入宿主细胞5铺平板获得克隆。在该育种方法中需两种工具酶（限制性内切酶、dna连接酶）和运载体（质粒），质粒上必须有相应的识别基因，便于基因检测。6.质粒的基本特性 1质粒是细菌细胞中独立存在的一种环状dna分子2几乎所有的质粒都带有一个或多个基因，而且这些基因的表达带之宿主细胞一些有用的特征。

优选的是将serb基因或serc基因与能够在大肠杆菌和/或棒杆菌细胞中自主复制的载体dna连接以制备重组dna，并且将此重组dna导入前述的大肠杆菌细胞中。为了将serb或serc导入棒杆菌，可将含有serb或serc的dna片断与在棒杆菌中具有功能的载体连接以产生重组dna，随后将它导入具有l-丝氨酸生产力的棒杆菌宿主以转化它。如图图 2-10图 2-9 9（3,5-二甲（3,5-二甲图 2-10 所示0 9,9-二（,9-双（3,5-二甲基-4-硝基基-4-硝基苯示： （3,5-二甲基16 二甲基-4-羟基 基苯氧基苯氧基苯基基-4-硝基苯基苯基）芴的苯基）芴基）芴的熔点苯氧基苯基）的核磁图谱 芴的结构分点测量图得芴的熔点 分析 得到其熔点为 点图 为17 9,9-二（3,5-二甲基-4-硝基苯氧基苯基）芴红外图谱如图 2-11 所示： 红外图谱的峰归属：ft-ir(kbr,cm -1 )：硝基的不对称伸缩振动吸收峰在：1509 cm -1 。

（18分）pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具，如图Ⅰ所示。

I．目的基因如果插入质粒的某抗性基因中，将使该基因失活。为了检查运载体是否导入原本无Ampr和Tetr的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图Ⅱ的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图Ⅲ的结果（空圈表示与Ⅱ对照无菌落的位置）。

（1）．pBR322质粒在基因工程中的作用是。

对于基因核苷酸序列背景清楚而无法获得克隆探针时，可采用pcr方法扩增某段基因序列，并克隆人合适的质粒载体中，即可得到自己的探针。21．(1)限制性核酸内切pcrb(2)启动子受体细胞中是否含有目的基因(3)农杆菌转化受精卵(4)抗原—抗体杂交22．解析：(1)图中的高血压相关基因是目的基因，质粒是该过程的运载体，二者必须用同一种限制酶进行切割才能露出相同的黏性末端，以便目的基因插入运载体。利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计合成引物,从菊苣叶绿体基因组中扩增包括rps7-rps12-trnv-16s-rdna基因在内的一段序列(genbank登录号为gq199478),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段.以叶绿体基因强启动子prrn驱动选择标记基因aada及报告基因gfp构建多顺反子表达盒prrn-aada-gfp-psba-3′,然后将表达盒克隆进菊苣叶绿体同源片段中,获得菊苣叶绿体定点整合表达载体pjag,酶切分析证明所构建的载体符合预期设计.该载体的构建为建立菊苣的叶绿体转化体系奠定基础,为进一步通过叶绿体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣叶绿体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台.。

（3）与图Ⅲ空圈相对应的图Ⅱ中的菌落表现型是，由此说明目的基因插入了中。pbr322质粒载体

II．下面是pBR322质粒的部分碱基序列，所编码蛋白质的氨基酸序列为“甲硫氨酸—精氨酸—谷氨酸—丙氨酸—天冬氨酸—缬氨酸…”（甲硫氨酸的密码子AUG也是起始密码子）。

但必须首先纯化该基因的编码蛋白，并测定6个以上的末端氨基酸序列，通过反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探针。以小鼠ＣＨ基因为例．如Ｃ ｕ和Ｃ ６基因片段被缺穴，那么先前重排的ＶＤＪ就会按照顺序与 中国农业大学博上学位沧文 文献综述 下一个ＣＨ基因即Ｃ ｙ ３发生重排，经转录和翻译后，编码Ｙ ３重链。通过对粉虱、小菜蛾高效的球孢白僵菌hfw-05 几丁质酶基因的克隆及序列分析,旨在从分子水平上了解hfw-05 菌株的几丁质酶特性.根据已发表的几丁质酶基因序列(eu828354)设计几丁质酶基因全长引物,扩增 hfwbbchit1 全长基因,与大肠杆菌(escherichia coli)克隆载体 pmd19-t 连接获得含有 hfwbbchit1 全长基因的重组质粒 pmdchit1 并测序.该基因的编码区包括1 047 bp,编码了348个氨基酸,分子量约为36.795 kda,进行同源性比较分析结果表明:其基因序列与球孢白僵菌菌株 ncim1216 几丁质酶基因(eu828354)和球孢白僵菌菌株 bb0062 几丁质酶基因(ay145440)的核苷酸同源性最高,同源性达到98%.氨基酸序列与球孢白僵菌菌株 bb0062 几丁质酶(aan41259)同源性达到99%.。

（ 4分）。

（11分）目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于________。观察上图，如果A为质粒，则C表示。

(2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过____________作用恢复________________________键，成功地获得了重组质粒。能形成重组质粒的原因是_______________________________________________________________________

优选的是将serb基因或serc基因与能够在大肠杆菌和/或棒杆菌细胞中自主复制的载体dna连接以制备重组dna，并且将此重组dna导入前述的大肠杆菌细胞中。为了将serb或serc导入棒杆菌，可将含有serb或serc的dna片断与在棒杆菌中具有功能的载体连接以产生重组dna，随后将它导入具有l-丝氨酸生产力的棒杆菌宿主以转化它。重组质粒上有标记基因，并不是转入农杆菌才能筛选，而是用农杆菌转化法，有利于重组质粒导入受体细胞。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特点是_______________________，下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。

将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿。（可多选）A．X－1B．X－2 C．X－3 D．X－4

（11分）目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如图一所示。

(1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于________。观察上图，如果A为质粒，则C表示。

(2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

d．用不同种限制酶处理质粒和含有目的基因的dna，可产生黏性末端而形成重组dna分子。（2）构建的重组质粒用bamhⅠ和ecorⅠ双酶切后，得到预期的2个片段4.4kb和1kb，分别表示质粒ptrchis a和megalin基因3189-4169。首先你得分别把含有目的基因和空载克隆载体的菌种养出来，一般过夜，然后用质粒提取试剂盒分别提取他们，pcr你的目的基因，同种酶双酶切载体与目的基因，构建酶连体系，然后你构建出了重组质粒，随后再进行相关鉴定~~可参考下相关的分子生物学实验手册上有相关的步骤方法。

优选的是将serb基因或serc基因与能够在大肠杆菌和/或棒杆菌细胞中自主复制的载体dna连接以制备重组dna，并且将此重组dna导入前述的大肠杆菌细胞中。为了将serb或serc导入棒杆菌，可将含有serb或serc的dna片断与在棒杆菌中具有功能的载体连接以产生重组dna，随后将它导入具有l-丝氨酸生产力的棒杆菌宿主以转化它。重组质粒上有标记基因，并不是转入农杆菌才能筛选，而是用农杆菌转化法，有利于重组质粒导入受体细胞。

本研究通过抗褐飞虱鉴定对不同抗虫水稻抗性进行评估,筛选出含不同抗性基因的抗虫品种。33.2μm质粒的特点1它大小6kb,正适合作克隆载体2拷贝数高，在酵母细胞内达到70－200.3有复制起点，复制酶由宿主提供4含有rep1和rep2基因编码的蛋白，与酵母的复制有关5含有flp转型基因，flp编码的蛋白是a型质粒转成b型。由于赋予抗诸如新霉素或潮霉素等底物的抗性的选择性标记基因仅可用在组织培养中，因此在体外和体内还可以将化学抗性基因用作选择性标记。

将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X－1混合连接，连接后获得的质粒类型有＿＿＿。（可多选）

A．X－1

B．X－2

C．X－3

D．X－4