下图1是获取用于构建基因表达载体的含人生长激素基因的DNA片

利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计合成引物,从菊苣叶绿体基因组中扩增包括rps7-rps12-trnv-16s-rdna基因在内的一段序列(genbank登录号为gq199478),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段.以叶绿体基因强启动子prrn驱动选择标记基因aada及报告基因gfp构建多顺反子表达盒prrn-aada-gfp-psba-3′,然后将表达盒克隆进菊苣叶绿体同源片段中,获得菊苣叶绿体定点整合表达载体pjag,酶切分析证明所构建的载体符合预期设计.该载体的构建为建立菊苣的叶绿体转化体系奠定基础,为进一步通过叶绿体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣叶绿体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台.。与昆虫ugt间同源性最低,与家蚕ugt间同源性为41%.ecor i-o片段+m13端含有编码olnpv orf129(ol-129)ol-129同源基因orf,由597 bp个核苷酸组成,在其起始密码子atg上游-64,-24 nt处各有1个tata box,其推测的氨基酸序列与ol-129同源性最高达81%,与ldnpv orf127同源性最低,为40%.明确了orernpv ecor i-o 片段的序列特征,以及orernpv egt 基因特性.。第二步同源重组，glpr-catsacb基因片段被glpr-deletion dna片段取代，glpr-deletion是以大肠杆菌atcc 8739的基因组为模板，用引物glpr-d-up/glpr-300-o-r扩增得到，其中glpr-d-up引物包含glpr基因atg前50 bp同源臂序列和20 bp与glpr基因taa后20 bp同源序列，glpr-300-o-r为位于glpr基因后300 bp位置的一段反向互补序列，pcr扩增得到的第二步同源重组片段分别含glpr上游50 bp同源臂和下游300 bp同源臂序列。

限制酶识别序列和酶切位点表

限制酶

识别序列(5′→3′)

(1) ①过程催化形成磷酸二酯键的酶有____________________，合成的人生长激素基因中________(选填“有”或“无”)与终止密码子相应的碱基序列。

通过 网站查找出hpo205和cytc基因编码序列, 针对基因的全长设计引物, 从成人肝cdna文库中成功扩增出相应的编码基因, 经酶切、连接、转化、鉴定后送测序, 结果表明pdbleu-grer、pdbleu-cycs、ppc86-gfer、ppc86-cycs载体构建正确, 这样成功构建出hpo205和cytc酵母双杂交载体(表, 图).。8. 对引物的修饰一般是增加酶切位点，应参考载体的限制酶识别序列确定，常常对上下游引物修饰的序列选用不同限制酶的识别序列，以有利于以后的工作。40.构建基因组文库的基因步骤1纯化全细胞dna.2部分限制性酶切的到适当大小的片段3插入到合适的载体上构建重组dna分子4重组dna分子经转化进入宿主细胞5铺平板获得克隆。

(3) 在构建表达载体的过程中对图中质粒、DNA片段进行合适的完全酶切后，向两者的混合物中加入DNA连接酶，若只考虑DNA切段两两连接，则混合物中将形成________种环状DNA。

(4) 2018年11月基因编辑婴儿事件震惊了世界，舆论一片哗然第一个作为重组dna载体的质粒，某科研团队利用“CRISPR/Cas9”技术将受精卵中的艾滋病病毒受体基因CCR5进行修改，拟培育出具有艾滋病免疫能力的基因编辑婴儿。下图3为向导RNA引导Cas9蛋白切割CCR5基因(目标DNA)示意图。

①向导RNA的合成需要________酶。Cas9蛋白是一种________酶。

若想用基因工程并通过土壤农杆菌向某种植物中导入抗旱基因，以下分析不合理的是()a．若用ti质粒作为抗旱基因的载体，要保证复制原点和用于转移t－dna的基因片段不被破坏b．农杆菌转化法自然条件下用于将目的基因导入双子叶植物和裸子植物c．用含有重组ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，可以通过植物组织培养技术培育出具有抗旱基因的植物d．若能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，则说明该基因工程项目获得成功18．北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。该研究中研究人员首次利用对超过20万人的大规模遗传数据进行分析，其中四分之一的个体都是糖尿病患者，此次分析重点针对基因组的39个区域，而此前这些区域也被认为对2型糖尿病的发病非常重要，通过揭示调解2型糖尿病风险的特殊dna序列，研究人员就可以确定dna上的特殊突变，同时他们还发现了基因组特定位置上的强烈信号，该信号可以同名为foxa2的调节性蛋白相互作用，而该蛋白可以作为基因表达的重要开关。异卵双生指的是在受精作用时，女性宫腔内有两枚卵细胞着床，并且同时发生受精作用，形成两个胚胎，这两个胚胎有各自的胎盘、有不同的基因。

③基因编辑婴儿引起舆论的关注，很多科学家表示反对第一个作为重组dna载体的质粒，请给出合理的理由______________。