定位针穿细胞接种法建立兔脑vx2肿瘤模型

１６ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．１ｅａｎ．１６７４－０９０４．２００９．０１．００５ 定位针穿细胞接种法建立兔脑ＶＸ２肿瘤模型水 （１．广西医科大学，南宁５３００２１；２．四川省肿瘤医院研究所，成都６１００４１）【摘要】 目的：探讨微创定位针穿刺细胞接种法建立兔脑ＶＸ２肿瘤模型的方法并观察肿瘤生长特性。方法： 经测量计算确定冠状缝的位置及其与正中矢状线的交叉点和接种位点后，采用可调节钻孔深度的金属钻在头颅正 中矢状线右侧５ｍｍ，冠状缝后５ｍｍ处接种位点钻一０１．２ｍｍ的穿刺孔，取ＶＸ２肿瘤细胞悬液０．１ｎｄ（１ Ｘ１０７细 肜ｍ１）注射接种入１２只２．５ ｌｃｇ一３ ｋｇ的成年Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ大白兔的大脑皮质表面下２ｍｍ深度内。接种后第６ 天、ｌＯ天和１４天，冠状切面测定肿瘤体积和观察组织病理学改变，以及神经系统体征变化。结果：ＶＸ２肿瘤细胞接 种入脑皮质后１２只成瘤，成瘤率为１００％；肿瘤体积与接种后的生长时间呈对数相关（，＝０．９１，Ｐ＜０．０１），其体积 倍增时间为１．３４天；接种１０天后，脑皮质表面血管较丰富，肿瘤呈卵圆形实质性生长，与正常脑组织边界清楚，肿 瘤中央明显坏死；肿瘤细胞明显浸润正常脑组织并形成瘤块，瘤周脑组织形成水肿带。

结论：采用定位针穿细胞注 射法颅内接种兔ＶＸ２肿瘤细胞能较好地模拟颅内肿瘤生长，其生长特性与原发性或转移性脑肿瘤相似，且可缩短 等待时间，尤其适合脑肿瘤的影像学诊断、ＣＴ灌注参数及放疗靶区勾画的实验研究。 【关键词】脑肿瘤；ＶＸ２瘤株；动物模型；兔 【中图分类号】Ｒ７３－３５＋２ ［文献标识码】Ａ ［文章编号】１６７４一０９０４（２００９）０１—００１６—０３ Ｔｈｅ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ＲａｂｂｉｔＶＸ２ Ｂｒａｉｎ Ｔｕｍｏｒ Ｍｏｄｅｌ Ｕｓｉｎｇ Ｃｅｌｌ Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ａＰｒｅ－ｓｕｒｇｉｃａｌＰｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ＬＵＯ Ｙｕｎ－ｘｉｕｌ，ＨＵＡＮＧ Ｊｉａｎ．ｍｉｎ９２，ＳＵＮ Ｃｈａｎｇ－ｊｉｎ２，ｅｔ ａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３００２１，Ｃｈ／ｎａ；２ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｈｏｓｐｉｔａｌ＆Ｉｒ撼ｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｅｎｇｄｎ ６１００４１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｃｒｅａｔｅ ａｒａｂｂｉｔ ＶＸ２ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｅｌ １１８ｉｎｇ ｃｄｌ ｉｎｏｅｕｌａｆｉｏｕ ａｐｒｅ一叭ｒｇｉｃａｌｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｍｉｃｒｏ．ｉｎｖａｓｉｖｅ鲫嗍．Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｄｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｂｙｉｎｅ．ａｓｕｒｏ ｉＩ唱ｔｈｅ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｆｒｏｍ ｔｏｐ ｉｎｄｓｏｒ ｔｅｅｔｈ ｆｏｒａｍｅｎｍａｇｎｕｍ ｃａｌｅＩ蜥ｎｇｏｕｔ ｃｏｒｏｉｌａｌ８１ｉｔｕｌｏｆ ｒａｂｂｉｔ ｓｋｕｌｌ，ｔｈｅ ｃｒｍｓｐｏｉｎｔ ０ｆ ｃｏｒｏｎａｌ ｓｕｔｕｒｅ ｗｉｔｈ船ｇｉｔｔａｌ ｓｕｔｕｒｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ０ｆ Ｏｏｌｘ肌ｌｌ ｓｕｔｕｒｅ ｓｅｔ盥ａ ｒａｔｉｏ ｄｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｆｒｏｍ ｔｏｐ ｉｎｃｉｓｏｒ ｔｅｅｔｈ ｔＯ ｆｏｒａｍｅｎ ｎｌａｇｎｕｍ ｉＩｌｌｌｌｌＩｔｉｓｉｔｅｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｅｆｏｒｅ ｏ咿ａｔｉｏｎ．１２ Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ ｗｈｉｔｅ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅｉ＃ｉｎｇ ２．５－３ ｋｇ ｗｅｒｅ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ ０．１ｍｌ ｖｉ ａｂｌｅ ＶＸ２ ｍｒｅｉｎｏｍａ ｅｅｌｈ（１１０７／ｍ１）ａｔ ａｄｅｐｔｈ ０ｆ ２ｍｍ ｂｅｎｅａｔｈ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｂｙ锄ｉｎｕ舶ｒａｎｉａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ１．２ ｍｍ－ｈｏｌｅ ｓＢ西ｎａｌｓｕｔｕｒｅ ５ｒａｉｎｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｃｏｒｏｎａｌｆｌｔｌＵｌ＿ｒｅ ｐｏｒｆｏ嘁ｅｄ ａｄｊｕｓｔａｂｌｅｄｅｐｔｈ ｍｅｔａｌｄｒｉｌｌ．Ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ｈｉ８ｔｏｐａｔｈｄｏｇｙｗｅｒｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ咖ｄａｙ ６。

１０ １４ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｉｎ １２ ａｎｉｍａｌｓ ｔｕｍｏｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ １００％ｆｏｌｌｏｗ－ｉＩｌｇ ｉｎｔｒａｃｅＴｅｂｒａｌ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ Ｕｌｍｏｒ ｓｉｚｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｌｏｇａｒｉｔｈｍｌｅ鼬ｌｌｉ加（ｒ＝Ｏ．９１，Ｐ＜０．０１），ｗｉｔｈ１．３４ ｄｅｙｓ ｏｆａ ｖｏｌｕｍｅ ｄｏｕ－ ｂｉｉｎｇ ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ ｃｏｒｔｉｃａｌ ８ｍ缸ｒｅｖｅａｌｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ鹏ｗ ｔｏｒＰａｏｕ８ ｂｌｏｏｄ ｗ＝ｓｓｄＢ．Ｔｈｅ ｔＵＸ］ＱＮ）Ｘ＂８ ａｐｐｅａｒｅｄ舾ｐａｌｅ，ｏｖａｌ—ｓｌ州ｐｌａｑｕｅｓ。ａｎｄ ｅｅｎｔｎｄ ｎｅｃｎ通ＢＷ８８ ｅｖｉｄｅｎｔ ｃｏｍｍｌｓｅｃｔｉｏｎ８．Ｉｎｖａｓｉｖｅ ｓｐｒｅａｄ ０ｆ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｌｏｎｇ ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ０ｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｓｔ，ａｎｄ ｐ口ｉｔＩｌｍｏｒａｌｃｅｒｅｂｒａｌ ｅｄｅｍａ ｗｅｌ＂ｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｓｐｅｃｉ－咖．Ｃｌ删如ｄ蛐：Ｒａｂｂｉｔ ＶＸ２ ｂｒａｉｎ ｔｕｉｌｌｏｒ ｍｏｄｅｌ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｕ８ｉｌ－ｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｃｏｕｌｄ ｓｉｍｕｌａｔｅ ｉｎｕａｃｒａｎｉａｌｇｒｏｗｔｈ，ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ０ｆ“ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐｒｉｍａｒｙｍｅｔａｓｔａｔｉｃｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒｓ舶ｗｅｌｌ．Ｔｈｉｓ ｍｏｄｅｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｍａｌｓｔｕｄｉｅｓ ｉｍａｇｅｄｉ唱ｍｅｉｓ ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｅｆｆｕｓｉｏｎ ＣＴ ｉｍａｇｉｎｇ ｔａｒｇｅｔｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ ｒａｄｉｏ．－【收稿日期】２００８—０９—２２；【修回日期】２００８一ｌｌ—１８ 【基金项目】 国家自然科学基金资助项目（３０６７０６１８）【作者简介】罗云秀（１９７６一），女，湖北襄樊人。

近年来，肿瘤生物学诊断与治疗领域取得了令人瞩目的成就，肿瘤的诊治已经进入了精准医学时代，为了加强肿瘤生物学诊断与治疗领域的交流，提高肿瘤生物学诊断与治疗水平，促进肿瘤生 物学诊断与治疗领域的国际交流与协作，南京医科大学附属南京医院 (南京市第一医院)、南京医学会、江苏省肿瘤个性化医学协同创新中心、江苏省恶性肿瘤生物标志物与防治重点实验室、江苏 省中医药研究院、南京肿瘤临床医学中心、世界华人肿瘤医师协会拟定于 2016 年 10 月 28 日至 30 日在南京举办 2016 年 (第八届) 南京肿瘤生物学诊断与治疗进展国际研讨会——肿瘤精准医学与多学科综合治疗。应用肿瘤悬浮液乳剂接种正常兔，也可能使易感兔产生主动免疫力．。用过滤的或未经过滤过的肿瘤组织[]，人工接种正常兔，很容易使此病传播，特别是棉尾兔更容易感染。

１．２传种兔ＶＸ２ 荷ＶＸ２瘤传种兔由广州市第一人民医院放射 科惠赠。用ＶＸ２实体瘤制成ＶＸ２细胞悬液于活体 兔腹股沟皮下注射传代。 １．３ ＶＸ２细胞悬液的制备 麻醉及无菌条件下剥取传种兔腹股沟实体瘤， 生理盐水冲洗，去除包膜，取瘤体边缘生长旺盛的 鱼肉样组织vx2肿瘤是什么肿瘤，用手术刀切成约２ｍｍ３大小，Ｈａｎｋ’液 ｌ０００ｒｐｍ离心洗涤５ｍｉｎ一１０ｒａｉｎ后，置组织块于 ２００目一３００目细胞筛匀浆器内，加适量含庆大霉素 的０．９％生理盐水研磨，收集细胞悬液，１０００ｒｐｍ离 心洗涤５ ｒａｉｎ至上清澄明，用无血清ＲＰＭＩ－１６４０液 调细胞浓度为ｌ１０７／ｍｌ，制成单细胞悬液，台盼蓝 排除法计活细胞数＞９５％。 １．４ ＶＸ２细胞颅内接种 ｍＬ／ｋｇ－Ｏ．３ｍｌ／ｋｇ）肌肉注射进行麻醉。麻醉后剔除头顶部毛，俯卧位固定于兔电热解 剖台上，用环形金属固定器固定头部。用千分尺测量 兔上切牙端沿矢状缝到枕骨大孔背侧的垂直距离 （己），按公式／ＪＲ＝Ｃ，计算出上切牙端沿矢状线到冠 状缝的垂直距离（Ｃ），Ｒ为兔上切牙端沿矢状线到冠 状缝垂直距离与到枕骨大孔背侧垂直距离的比值（图 １）。标出矢状缝与冠状缝的交点（Ａ），于冠状缝后 ５ｍｍ处和矢状缝右５ｍｍ处分别作与冠状缝和矢状缝 平行的两条直线，其交汇点即为接种位点口（图２）。

作Ａ与Ｂ点连线的延长线，以Ｂ点为中心，作一 １７０．５ｅｍ一１．０ｃｍ的手术切口标记。常规消毒、铺巾后， 切开头皮，切口约０．４ｃｍ—Ｏ．８ｃｍ。划开骨膜，用一可 调节钻孔深度的金属钻（图３）钻一１．２ｍｍ、深ｌｍｍ —１．５ｍｍ的孔，用１．０ｍｌ注射器吸取０．１ｍｌ ＶＸ２细胞 悬液（Ｉ１０７／ｍ１），用血管钳固定针头使穿刺深度为 颅骨板表面下３ｍｍ一５ｍｍ，将注射器针头刺人接种位 点，缓慢注入细胞悬液，拔针后即缝合头皮。术后常 规用青霉素柏万一６０万单位，庆大霉素４万单位肌 肉注射３天，观察脑神经症状。 Ｌ－————．．．———．一％ｍｉｔｔ————————————．－一 图１兔颅骨解剖结构图 图２接种位点 图３钻孔深度调整 １．５病理学检查 １２只脑内接种ＶＸ２肿瘤的兔，按不同生长时间 （６天、１０天和１４天）处死，揭开颅骨，观察脑组织、血 管及肿瘤生长情况后，取出整个脑组织，于甲醛固定 液中固定，进行冠状面切片测定肿瘤体积，以及肿瘤 病理和组织学检查。 ２结果 ２．１一般观察 １２只实验兔接种后无意外死亡；接种１０天有３只 （３７．５％，４／８）荷瘤兔先后出现厌食，流涎；１４天有３只 （７５％，３／４）出现惊恐、抽搐及偏瘫等神经症状。

如果脑转移性肿瘤长期进行性增大，或增大较快vx2肿瘤是什么肿瘤，或是转移性肿瘤压迫静脉致回流受阻，或是大脑导水管受压影响脑脊液排放和吸收，或是动脉受阻促使脑细胞缺氧，或是转移灶直接损伤血管内膜导致血脑屏障改变，血管通透性增强，致使细胞外间隙的水和离子增多并沿白质束纵行扩散，出现同侧大脑半球水肿影响脑的正常代谢。研究了一种未血管化肿瘤生长模型的自由边界问题,模型与此类其它模型有着明显的不同,它引入新的运动项来描述肿瘤内细胞的运动,反映了肿瘤内细胞运动的＂接触抑制＂性质.运用banach不动点理论和抛物型方程的l~p理论,证明了模型存在唯一整体解.。但是由于受制作工艺的限制,芯片结构精度还不够高而且管道为不可侵入的pdms材质,故还不能满足未来细胞尺度的特异性研究需求,如不同肿瘤细胞粘附血管内皮的能力和微观机理、肿瘤细胞在血流中贴附血管内壁之后穿过血管向组织内部继续侵袭的特点等。

钻孔引流组降低幅度明显高于大骨瓣 组，差异有统计学意义(p＜0.01).结论 在高血压脑出血(出血量34～89 ml)患者手术方式的选择上，大骨瓣开颅血肿清除术具有血肿清除率高的优势，而颅骨钻孔血肿抽吸引流术在促进日常生活活动能力恢复和降低并发症发生率方面 优于大骨瓣开颅血肿清除术，临床医师应根据病情需要选择合适的手术方式，从而降低病死率和改善预后.。头痛，可聚集成淡绿色肿块、军九血癌也就是白血病，如乳突绿色瘤、脑膜，致病人出现贫血，俗称绿色瘤、肝、颈强直等临床症状和体征，白血病细胞有着与肿瘤细胞相同的特点。目的 分析大骨瓣开颅血肿清除术与颅骨钻孔血肿抽吸引流术治疗高血压脑出血的临床效果.方法 采用随机数字表法将121例高血压脑出血患者分为2组，大骨瓣组61例行大骨瓣开颅血肿清除术治疗，钻孔引流组60例给予颅骨钻孔血肿抽吸引流术治疗，观 察2组患者血肿清除率、死亡、日常生活活动能力和并发症发生情况.结果 大骨瓣组血肿清除率(血肿清除≥80%)90.16%，明显高于钻孔引流组的76.67%，差异有统计学意义(χ2=3.9940，p＜0.05)。

我们认为采用这种微创定位颅骨钻孔／细胞注 射接种法可在短时间内提供性质稳定、生长迅速的 兔脑Ｖｘ２肿瘤模型，且操作简便，尤其适用于脑肿 瘤的影像学诊断包括灌注ＣＴ参数［９１０］和放疗靶 区勾画的实验研究。 致谢 感谢四川省肿瘤医院病理科在本次实验中提供 的帮助！ ［参考文献】 ［１］Ｄａｖｉｄ Ｆ，Ｍｏｒｇａｎ Ｊ，Ａｌｌａｎ Ｗ．Ｓｉｌｂｅａｍａｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｒａｉｎ ｔｕｍｏｒ ｍｏｄｄ ｒａｂｂｉｔｓ［ｊ］．ＪｓＩ蟛ｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１９８２，２０ （４）：２１８ ２２０． ｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ ｒａｂｂｉｔｂｒａｉｎ＾ｍｏｄｅｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｉｅｓ ｂｌｏｏｄ—ｂｒａｉｎｂ耐目［Ｊ］．．Ａｌ倒Ｃａｌｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８８，（１３１）：３６ｌ－３７２． 【３］Ｃａｒｓｏｎ ＢＳ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＪＨ．Ｇｒｏｍａｎ ＳＡ，ｃＩ ａ１．Ｉｍｐｍｖｅｄ ｒａｂｂｉｔ ｂｒａｉｎ Ｒｌｍｏｒ ｍｏｄｅｌ ａｍｅｎａｂｌｅ ｄｉａｇｎｏｓａ矗ｅｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ叼，１９８２，ｌｌ：６０３．６０８． ［４】康立清，张云亭，孙世梅．等．兔ＶＸ２脑瘤的模型建立及病理 学、影像学初步研究［Ｊ］．中华放射肿瘤学杂志，２００５，３９（３）： ３０６．３０９． ［５］李飞，冯华，林江，等．兔脑种植ＶＸ２肿瘤动物模型的建 立［Ｊ］．中国实验动物学报，２００６．１４（３）：１９３．１９６． ［６】Ａｎｅ＆ａｃｈ Ａ．Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ＬＷ，ｓｉｄＩｃｙ ＹＡ．ａｅｇｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｍｎｃｅｓ ｏｆ删眙ｔｕｍｏｒｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ ０１＇ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｅｓ，１９７８．３８：１７３９． １７“． ［７］Ｋｉｄｄ ＪＧ，Ｂｏｕｓ Ｐ．Ａ ｔｎｍｓｐｌａｎｔａｂｌｅ ｒａｂｂｉｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｙ ８ｖｉｒｕｓｉｎｄｕｃｅｄ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ａ１．ｒｅｎａｌ ｆｏｒｍ［Ｊ］．Ｊ Ｅ印Ｍｅｄ，１９４０．７１：８１３．８３８． 胡运胜，陆非，赵京龙，等．兔ＶＸ２瘤磁共振成像技术的探讨［Ｊ］．中国医学计算机成像杂志．２００６，１２（６）：４２６．４２８． ＡｌｄｕａＣｅｎｉｃ，Ｄａｒｉｕｓ Ｇ．Ｎａｂａｖｉ，Ｒ响ｅＩａｒｙ Ａ．Ｃｒａｏｎ ＣＴｍｅｔｈｏｄ ｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓ：ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｃｅｒｅｂｒａｌｂｌｏｏｄ ｆｌｏｗ叫ｌｐ８［Ｊ］．ＡＪＮＲ Ａｍ ＪＮｏｎ． ｍｍｄｉｄ，２０００．２１：４６２．４７０． ［１０】康立清，张云亭。

30余篇学术论文先后刊登在中华外科杂志、中华泌尿外科杂志、anticancer research、中华肿瘤杂志、癌症杂志、中华实验外科杂志、临床泌尿外科杂志等国内外核心杂志上。孟祥旭 移动设备上基于三维模型的线条画绘制[期刊论文]-计算机辅助设计与图形学学报 2007(08)引用本文格式：孙玉红.屠长河.sun yuhong.tu changhe 基于线条画的2.5d卡通模型[期刊论文]-计算机辅助设计与图形学学报2013(9)。 参考文献格式示例如下（中英文具体见样本）： 连续出版物（期刊）：序号、关键词（英、外文与中文参考书目（先英文后中文，以作者的姓按字母顺序排列）、附录（仅列有参考价值的内容） 论文 声明 论文 正文都必须包括引言（introduction）,正体，出版地，作者，出版年，题名， 论文 集名，出版地，起止页码 学位 论文 ：序号： times new roman 打印格式，它是 论文 的第一页，写有 论文 题目。