芥子气暴露后动物体内生物标志物——DNA加合物的检测和代谢研究.pdf

⑸漂白粉 四、仪器 1. 研钵 2. 250ml 碘量瓶 称量瓶 量筒，20ml 10ml 5ml 3. 150ml 烧杯 容量瓶 250ml 具塞的磨口锥形瓶 4. 分析天平 0.0001g 台秤 0.1g5. 酸式滴定管，棕色 试剂瓶，棕色 6. 滤纸 7. 移液管 25ml 八、实验步骤 8.1 试剂溶液的制备 ①na2s2o3 溶液的配制及标定。本指导原则所指分析方法是为完成上述各检测项目而建立的测试方法，一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、系统适用性试验、供试品溶液制备、对照品溶液制备、测定、计算及测试结果的报告等。仪器校正好后，按上述水样的测定手续，先测单倍试剂空白溶液的含硅量（sio2）单，再测双倍试剂空白溶。

30．l-2．3．2．3碱基水解步骤………………………………………………………………．32．3．3 仪器分析方法考察…………………………………………………………．31．2．3．3．1液相方法……………………………………………………………………一3{．2．3。3。2蒺谱方法……………………………………………………………………，32。2．3．碡方法学考察…………………………………………………………………．32。2．3+4．1选择性………………………………………………………………………，32。2．3。4。231作曲线…………………………………………………………………………………………．．33。2．3．4．3检测限和定薰限……………………………………………………………．33。2．3。4．4圈收率………………………………………………………………………，33．2．3。4．5准确度和精密度……………………………………………………………．33．2。3．4．6基矮效应……………………………………………………………………．3莲．2，4 结果与讨论……………………………………………………………………，34．2．4．1 样品前处理方法的选择与优化……………………………………………．34。

2．4．1．1提取DNA步骤……………………………………………………………，34．2．4．1．2紫外分光光虚法(Uv)测定DNA含量与纯度…………………………．36。2．4．1．3碱基水鳞步骤………………………………………………………………．37。2．4，2 仪器分耩方法考察…………………………………………………………．莲l。2，4．2+l滚相方法……………………………………………………………………，4l。2．4．2。2质谱方法……………………………………………………………………．42。2．4．3 方法学考察…………………………………………………………………．42。 万方数据堡．!：兰篁堡茎目录2．4．3．1选择性………………………………………………………………………一42．2．4．3．2工作曲线……………………………………………………………………一43．2．4．3．3回收率………………………………………………………………………一44—2．4．3．4准确度和精密度……………………………………………………………一45．2．4．3．5基质效应……………………………………………………………………一45．2．5 本章小结………………………………………………………………………．．．45一第三章芥子气暴露后sD大鼠各脏器中SM-DNA加合物的检测及毒性研究……一46．3．1 引言……………………………………………………………………………．．．46—3．2 试剂与材料……………………………………………………………………¨．47．3．2．1 主要仪器……………………………………………………………………一47．3．2．2 试剂…………………………………………………………………………．48—3．2．3．1液相条件……………………………………………………………………一48．3．2．3．2质谱条件……………………………………………………………………一48．3．2．4 实验动物……………………………………………………………………一49．3．3 实验部分………………………………………………………………………．．．49—3．3。

l 溶液的配制…………………………………………………………………一49—3．3．2 动物实验……………………………………………………………………一50一3．3．2．1安全注意……………………………………………………………………一50—3．3．2．2皮肤染毒实验………………………………………………………………一50—3．3．2．3样品采集……………………………………………………………………．50一3．3．4 数据处理……………………………………………………………………．51．3．4 结果与讨论……………………………………………………………………．．．51-3．4．1 SD大鼠各组织中SM—DNA加合物的含量检测…………………………．51—3．4．1．1低剂量染毒组检测结果……………………………………………………．51—3．4．1．2中剂量染毒组检测结果……………………………………………………．53—3．4．1．3高剂量染毒组检测结果……………………………………………………一55—3．4．1．4综合分析……………………………………………………………………一58—3．4．2 SD大鼠脂肪组织中SM．DNA加合物的含量检测………………………一61-3．5 本章小结………………………………………………………………………．．．63一第四章芥子气暴露后SD大鼠骨髓中SM．DNA加合物的检测及毒性研究…………．65． 万方数据旦墨——______-‘—______———______——__"_w_-—●—__HHH———●H___Ⅲ●——__H___-——____W-————w—__-—_____————————————一一一薄!：堂堡篓茎一一4+1 鼍l富……………………………………………………………………………………………。

一65—4+2 试裁与材料……………………………………………………………………¨一65·4．2．1 主要仪器……………………………………………………………………一65—4．2．2 试剂…………………………………………………………………………………………．一66—4．2．3 仪器分析条件………………………………………………………………一66—4．2．3．1液相条件……………………………………………………………………一弱一4。2。3，2矮谱条件……………………………………………………………………一酾．4。3 实验部分………………………………………………………………………，67．4。3+1溶滚的配制…………………………………………………………………。67．4。3。2 样品采集及处理……………………………………………………………。68．4．3．2．1样品采集……………………………………………………………………．68．4．3．2．2胬髓细胞的收集……………………………………………………………．68．4．3．2．3骨髓细脆的分型……………………………………………………………一酩．4．3，2，4骨髓缨胞鳃计数……………………………………………………………一68。

panciera是能在脆筒上叠冰激凌球最多的人，他一共叠了121个。2、脆筒上叠得最多的冰激凌球。在解剖显微镜下行椎板切除术,沿背正中线由骶髓向上至胸髓逐个椎骨切开,从切口用显微镊仔细分开椎骨暴露脊髓,之后使用显微镊夹住胸髓端,轻轻上提,用显微剪剪断脊髓双侧神经根,取出附着有蛛网膜和软膜的脊髓,在冰acsf中撕去脊髓表面的蛛网膜和软膜,并修整为适当的大小,将制备好的腰髓放在凹槽内,将琼脂块连同脊髓粘贴于切片盒内。

5。2 试裁与捞料……………………………………………………………………¨．75—5．2．1 主要仪器……………………………………………………………………．75。5，2．2 试剂…………………………………………………………………………………………………．，76．5．2．3 实验动物……………………………………………………………………．76。lV 万方数据博?I：学位论文目录5．3 实验部分………………………………………………………………………．．．76．5．3．1 溶液的配制…………………………………………………………………一76—5．3．2 动物实验……………………………………………………………………一77．5．3．2．1安全注意……………………………………………………………………一77．5．3．2．2SD大鼠芥子气皮肤染毒实验……………………………………………．．．77．5．3．2．3样品采集……………………………………………………………………一78．5．3。2．4家兔芥子气皮肤染毒实验…………………………………………………一78．5．3．2．5样品采集……………………………………………………………………一78—5．3．3 样品前处理步骤的条件优化………………………………………………．79．5．3．3．1尿液中四种SM-DNA加合物固相萃取柱的选择…………………………一79．5．3．3．2尿液中四种SM-DNA加合物固相萃取淋洗液的选择……………………一79—5．3．3．3尿液中四种SM-DNA加合物固相萃取洗脱液的选择……………………一79．5．3．4 仪器分析方法考察…………………………………………………………．79．5．3．4．1液相(UPLC)方法…………………………………………………………一79—5．3．4．2质谱(MS)方法…………………………………………………………．．．80．5．3．5 尿液中四种SM．DNA加合物检测方法的方法学考察……………………一80—5．3．5．1选择性………………………………………………………………………一80一5．3．5．2工作曲线……………………………………………………………………一80．5．3．5．3检测限和定量限……………………………………………………………一81—5．3．5．4回收率………………………………………………………………………一81—5．3．5．5准确度和精密度……………………………………………………………一81．5．3．5．6基质效应……………………………………………………………………一81—5．3．5．7方法稳定性…………………………………………………………………．82—5．3．6 芥子气皮肤暴露后SD大鼠尿液中SM-DNA加合物的检测及代谢研究一82—5．3．7 芥子气皮肤暴露后家兔尿液中SM—DNA加合物的检测及代谢研究……．82—5．4 结果与讨论……………………………………………………………………一83．5．4．1 样品前处理步骤的条件优化………………………………………………一83．5．4．1．1尿液中四种SM-DNA加合物囤相萃取柱的选择…………………………一83—5．4．1．2尿液中四种SM—DNA加合物固相萃取淋洗液的选择……………………一84—5．4．1．3尿液中四种SM—DNA加合物固相萃取洗脱液的选择……………………一84一V 万方数据戆l：学位论文绥录5．4．2 纹器分祈方法考察…………………………………………………………．黼。

5．4。2+l液裾(UPLC)方法………………………………………………………，86．5．4。2．2震谱(MS)方法…………………………………………………………，86—5．4。3 尿液中四种SM．DNA加台物检测方法的方法学考察……………………。86．5．4．3．1选择性………………………………………………………………………．，86—5．4．3．2王作蘸线……………………………………………………………………。86．5．4。3．3阐收率………………………………………………………………………。88—5．4。3．4准确度翻精密度……………………………………………………………一88。5．4。3．5准确度和精密度……………………………………………………………一89．5．4。3．6基质效应……………………………………………………………………。89．5．4。3．7方法稳定性…………………………………………………………………．90。5．4．4 莽予气皮肤暴露着SD大鼠藤液审SM-DNA热合物的检溅及代Jl嘉l磷究，92．5．4。5 芬子气皮肤暴露詹家兔漾滚枣SM-DNA加会物的检测及代谢研究……。舛。