滇桂艾纳香石油醚部位化学成分及挥发性成分的分析-analysis of chemical constituents an

[1]刘华钢，陆峥琳，赖茂祥等. 中药挥发油类成分提取分离研究概况[j]. 辽宁中医药大学学报，2009年11月，第11期，第11卷：5-8.。中药有效成分或有效部位提取分离的应用中药具有成分复杂，药材多样性强的特征，所有的成分在分子量上都存在着一定的差异，而这种差别正好处在超滤切割分子量的范围当中，所以，我们选择孔径恰当的超滤膜进行超滤处理，同时在这一过程中我们还要采取筛分的方式将不同的成分分离和归纳出来，分离的产物可以是一种成分，也可以是某一个分子量段位当中的多个成分，最近几年，超滤法已经在中药有效成分提取分离当中得到了非常广泛的应用。 （2）提取与分离三种生物碱的实验流程如下：酸水（2%h 2 so 4 、2%酒石酸等）溶解、滤过 氨水调 ph9～10 chcl 3 萃取 总生物碱 酸水滤液 chcl 3 萃取（或苯等萃取） chcl 3 层 （脂溶性杂质） 酸水层 chcl 3 层 碱水层 2%naoh 萃取碱水层 chcl 3 层 （c） nh 4 cl/chcl 3正丁醇层 （b） chcl 3 层 （a） 正丁醇萃取 水层 （水溶性杂质）4.某药材的乙醇提取浓缩物中含有小檗碱、四氢巴马汀、小檗胺三种生物碱及水溶性杂质、脂溶性杂质，设计提取分离各类成分试验流程。

采用气相色谱与质谱联用仪(GC-MS)，对滇桂艾纳香挥发油、石油醚浸泡提取物进行化学成分分离鉴定。结果：从滇桂艾纳香药材的石油醚提取部位中共分得5个化合物，鉴定了4个。根据理化常数和各光谱(UV、IR、EI-MS、1H-NMR、13C-NMR)以及文献对照确定单体化合物分别为：木栓酮(Ⅰ)，木栓醇(Ⅱ)，豆甾醇(Ⅲ)，β-谷甾醇(Ⅳ)。从滇桂艾纳香挥发油中鉴定了26个（水蒸汽蒸馏物）和40个（超临界CO2提取物）成分。结论：本实验从滇桂艾纳香石油醚部位中分离得到木栓酮、木栓醇、豆甾醇、β-谷甾醇。其中木栓酮和木栓醇均从本植物中首次分离得到。本实验分析了滇桂艾纳香药材中化学成分的组成，所分离出的化合物为滇桂艾纳香药材的指纹图谱研究和药理活性研究提供了物质基础，有利于滇桂艾纳香药材的质量标准控制研究和药理活性研究；为滇桂艾纳香药材的临床应用及进一步研究与开发提供了科学依据。本实验对滇桂艾纳香挥发油成分进行了GC-MS鉴定，鉴定出多种烷烃，烯烃、酯类和脂肪酸类化合物，为全面了解滇桂艾纳香挥发性成分提供了参考依据，并为充分开发滇桂艾纳香资源、控制滇桂艾纳香质量提供科学依据。关键词：滇桂艾纳香；石油醚部位；挥发油；化学成分；波谱解析ExperimentalStudiesontheChemicalConstituentsaboutthePetroleumEtherPortionandthevolatileconstituentfromBlumearipariaDC.ABSTRACTObjective:StudyontheChemicalconstituentsofpetroleumetherportionandthevolatileoilconstituentaboutBlumearipariaDC.Toseparateandanalyzechemicalconstituentsofthe70%ethanolextractfromtheplants,providethematerialfoundationforthesakeoffindingoutthebasicsubstanceofpharmacological.ThepaperalsoshowsthescientificfoundationformakesgooduseofGuangXi’sherbalresourcesufficiently.Methods:The70%ethanolexactweredividedintofourportionsbyrefluxwithhotpetroleumether,hotchloroform,hotethylacetateandhotn-Butylalcohol,whicharepetroleumetherportion,chloroformportion,ethylacetateportion,n-buohportion.ThepetroleumetherportionfromBlumearipariaDC.wereseparatedandpurifiedbysilicagelcolumnchromatographywithgradientelution,andrecrystalmethods.Thestructuresofcrystalswereidentifiedbyphysiochemicalproperties,spectrumanalysis(UV,IR,EI-MS,1H-NMR,13C-NMR)andliteraturescontrast.Usinggaschromatography-massspectrometer(GC-MS)studythevolatileandpetroleumetherextractconstituentofBlumearipariaDC.andidentificationofchemicalconstituents.Results:FivecomponentswereobtainedfrompetroleumetherportionandfourwereidentifiedasFriedelin(Ⅰ);Friedelino(Ⅱ);Stigmasterol(Ⅲ);β-sitosterol(Ⅳ).byphysiochemicalproperties,spectrumanalysis(UV,IR,EI-MS,1H-NMR,13C-NMR)andliteraturescontrast.FromBlumearipariaDC.volatileoilwereidentifiedby26(steamdistillate)and40(supercriticalCO2extract)component.Conclusions:Inthisstudy,BlumearipariaDC.partsofpetroleumetherisolatedfriedelin,friedelanol,stigmasterolandβ-sitosterol.Friedelinandfriedelanolwerethefirsttimeinthisspecieswasisolated.ThechemicalconstituentsintheBlumearipariaDC.wereindentified.ThseschemicalconstituentsaretobetheprovidedmaterialbasisforitsfingerprintsandPharmacologicalactivityresearch,andgoodforitsqualitycontrl.Inthisstudy,pairsofBlumearipariaDC.volatileoilcompositionoftheGC-MSidentification.Identifiedavarietyofalkanes,alkenes,estersandfattyacidcompounds.Thisstudyprovidescientificbasisforitsexploringandclinicresearch.ItalsobegoodformakinggooduseofGuangXi’sherbalresourcesufficientlyandfindingagoodsafemedicalinChinesemedical.KeyWords:BlumearipariaDC.;Petroleumetherportion;Volatileoil;Chemicalconstituents;Spectrosiopicanalysis.引言滇桂艾纳香(Blumeariparia(Bl.)DC.)为菊科(Compositae)艾纳香属(Blumea)植物。

滇桂艾纳香广西壮族民间用药，又名管牙、假东风草，为菊科艾纳香属植物滇桂艾纳香的干燥全草。广泛分布于印度、缅甸、泰国、马来西亚、中南半岛、菲律宾、印度尼西亚、巴布来新几内亚和所罗门群岛[1]。在我国主产于广西西南部，滇桂艾纳香在广西有较长的临床应用历史，壮医认为其味微苦淡、性微温，具有活血、止血、利水的功效，用于瘀血阻滞、经期提前、经期过长、产后血崩、产后浮肿、功能性子宫出血、阴疮等多种妇科病的防治[2]。滇桂艾纳香作为广西地方特产具有止血作用的壮族民间草药，广泛应用于广西民间，尤其在广西百色地区有较长的药用历史，也是妇科常用药——妇血康的主药之一，有较好的药理活性[3～5]。目前，关于该属植物化学成分国内外研究的报道不是很多，研究发现本属植物所含化学成分主要包括挥发油类、黄酮类、萜类、芳香族类等[6～26]，而对滇桂艾纳香的化学成分的报道研究较少，主要集中在滇桂艾纳香挥发油化学成分分析[6,7]和黄酮类物质[13,14,17]的研究中。另外有报道通过柱层析方法从滇桂艾纳香小极性部位分离出β-谷甾醇[13]、豆甾醇[13]、胡萝卜苷[21]，(24S)豆甾-4-烯-3-酮[26]、(24S)豆甾-4-22-二烯-3-酮[13]等甾体类化合物。

此外，从滇桂艾纳香乙酸乙酯和正丁醇部位分离鉴定出原儿茶酸、原儿茶醛、对羟基苯甲醛、原儿茶酸甲酯、咖啡酸甲酯[13,14]、丁香酸、没食子酸、香草酸、水杨酸、咖啡酸[20]等芳香类物质。滇桂艾纳香作为广西地方特产具有止血作用的壮族民间草药，具有补血活血、祛瘀生新、敛血止血的功效，常用于产后血崩、产后浮肿等。然而在药理作用的研究，尤其是药理活性化学成分的相关研究并没有报道。本课题主要以滇桂艾纳香为研究对象，分离分析其石油醚部位化学成分，为其药理单体筛选奠定基础。因此，通过对滇桂艾纳香有效成分的研究，为充分利用滇桂艾纳香资源提供科学依据，并对临床使用具有重要的指导意义。正文第一部分滇桂艾纳香药材的提取和分离1原料药材、仪器及试剂1.1原料药材滇桂艾纳香药材采自广西白色、龙州地区，经广西中医学院药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为菊科艾纳香属植物滇桂艾纳香(Blumeariparia(Bl.)DC.)的全草。标本存于广西中医学院药物分析教研室。1.2实验仪器UVAgilent8453紫外—可见分光光度仪(波长范围：190-800nm，分辨率：0.1nm)，美国安捷伦公司；IRNEXUS470型(FT-IR)傅立叶红外分光光度计，(分辨率：优于0.2cm-1；波数范围：7500~370)，美国尼高力仪器公司；NMR瑞士BrukerDre-500MHz(仪器频率：1H500.00，13C125.7，探头：Dual)；瑞士BrukerAV-400MHz(仪器频率：1H400.13，13C100.62，探头：QNP)；MSZAB-HS双聚焦磁质谱仪(质量范围：4-2000u分辨率：1000~10000)，英国VG公司；GC-MSAgilent6890N/5973NGC-MS联用仪，美国Agilent公司；旋转蒸发仪RE-52AA旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；电子分析天平METTLER-AE100电子分析天平，瑞士METTLER公司；层析柱各种不同规格口径的普通玻璃拄；(注：光谱测定除UV、IR外，NMR、EI-MS、FAB-MS测定均由中国科学院昆明植物所测试中心测试。

)1.3试剂柱层析硅胶(100-200目)：青岛海洋化工工厂生产；薄层层析硅胶G(200-300目)：青岛海洋化工工厂生产；石油醚、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、丙酮、无水乙醇、乙醇等均为分析纯，食用级酒精、纯化水。1.4滇桂艾纳香药材提取和分离过程将8.9Kg滇桂艾纳香粉碎为粗粉，用70%乙醇浸泡72h后，渗漉提取，收集渗漉液，减压回收乙醇，浓缩，干燥后得浸膏1173.9g。得膏率为13.2%。用1000g硅胶(100-200目)拌匀后，依次用石油醚(60-90℃)、氯仿、乙酸乙酯、水饱和正丁醇回流提取，回收溶剂，浓缩得到石油醚部位干膏(18.62g)、氯仿部位干膏(25.99g)、乙酸乙酯部位干膏(22.34g)、水饱和正丁醇部位干膏(154.92g)。具体分离过程见下图（1-1）：滇桂艾纳香药材(8.9kg)70%乙醇浸泡72h渗漉药渣70%乙醇浸泡48h渗漉渗漉液药渣减压浓缩70%乙醇提取物(1.17kg)1000g硅胶拌样石油醚回流提取石油醚浸膏(18.62g)不溶物氯仿回流提取氯仿浸膏(25.99g)不溶物乙酸乙酯回流提取乙酸乙酯浸膏不溶物(22.34g)正丁醇提取正丁醇浸膏(154.92g)图1-1滇桂艾纳香药材提取总流程图2化学成分预实验2.1水提取液取滇桂艾纳香药材粗粉10g，加水100mL，冷浸24小时，滤过，即得冷水供试液。