【题文】图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切

【题文】图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRI、BamHI、Hind Ⅲ的酶切位点。下列有关叙述错误的是

【题文】下列是基因工程的有关问题，请回答：

（1）限制性核酸内切酶可以识别双链DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的（填化学键名称）断裂，形成的末端总体可分为两种类型，分别是。

（2）目的基因和运载体重组时需要的工具酶是，和限制性核酸内切酶相比，它对所重组的DNA两端碱基序列（有或无）专一性要求。

（3）图l表示构建表达载体时的某种质粒与目的基因。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。

分析可知，最好选择限制酶切割质粒，限制酶切割目的基因所在的DNA，这样做的好处分别是、_。

（4）人的肤色正常与白化病受常染色体上基因A和a控制。若白化病型因与相对应的正常基因相比，白化病基因缺失了一个限制酶的切点，甲、乙、丙3人白化基因或相对应正常基因酶切后的电泳结果如图2。

由图2可以判断出，乙和丙的基因型分别是、。如果甲与丙婚配，后代患病的概率为____。

根据引物设计的酶切位点，分别对pcr产物和质粒载体进行酶切，酶切后的产物也要进行回收。1.2.1 酵母双杂交载体的构建: 利用pcr扩增的方法从成人肝cdna文库中获得hpo205和cytc编码基因的dna序列, 通过相应限制性内切酶酶切后, 与同样酶切后的含dna结合结构域(dna binding domain, db)的pdbleu空载体和含转录激活结构域(activation domain, ad)的ppc86空载体连接, 连接产物转化e.coli. jm109感受态, 相应抗性筛选(pdbleu: 卡那抗性。答案：(1)小于(2)限制酶反转录(3)pcr技术基因表达载体的构建启动子、终止子、目的基因(4)农杆菌转化法dna分子杂交24．(1)预期蛋白质的功能(2)基因化学(3)感受态细胞转化(4)农杆菌转化法25．(1)dna聚合126(2)①繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少②保证目的基因和载体定向连接(或防止目的基因和载体在酶切后产生的黏性末端发生任意连接)③标记基因(3)合成的核苷酸单链较长，产生缺失碱基的现象。

⑴将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有______种图为某质粒表达载体简图。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化。

⑵用上述几种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是____________________；

⑶在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是。

⑷基因工程是一柄“双刃剑”，一方面可以极大地提高栽培作物的基因潜力，打破了种间的______隔离，从变异的角度看，基因工程的原理是_____________；另一方面也可能给生态系统和人类带来安全隐患，举一例简要说明：_______________________。

根据引物设计的酶切位点，分别对pcr产物和质粒载体进行酶切，酶切后的产物也要进行回收。1.2.1 酵母双杂交载体的构建: 利用pcr扩增的方法从成人肝cdna文库中获得hpo205和cytc编码基因的dna序列, 通过相应限制性内切酶酶切后, 与同样酶切后的含dna结合结构域(dna binding domain, db)的pdbleu空载体和含转录激活结构域(activation domain, ad)的ppc86空载体连接, 连接产物转化e.coli. jm109感受态, 相应抗性筛选(pdbleu: 卡那抗性。3、用限制性内切酶ecori和kpni双酶切ppink_lc载体，回收约7.7kb的载体骨架。

据图回答：

通过连接酶将酶切后的pcr产物和质粒载体进行连接。根据酶切位点，将目标pcr产物以及相应载体进行酶切，获得粘性末端的dna产物后，进行琼脂糖凝胶电泳，根据目标条带大小选取相应片段切胶回收。4、将步骤2的酶切产物和步骤3的载体骨架连接，得到重组质粒ppink-lc-hsa。

三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。

（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；

我认为没有太大影响，orf正确就行，但是如果载体上启动子需要诱导物才能启动基因的表达的话，鉴于后序实验，建议用载体上的启动子，这样容易控制基因的表达。pcbp2 全长进行 sali/noti 酶切，插入事先用 sali/noti 酶切得到的大肠杆菌表达 载体 pet-28a 中,得到大肠杆菌表达质粒 pet-28a-pcbp2。据已测序的上西早生柿etr5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,pcr扩增到2个etr5-uenishiwase基因片段.2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断.连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载体psmak321的35s启动子和nos终止子之间,构建成uenishiwase-etr5基因的rna干扰植物表达载体.载体质粒经酶切鉴定正确后通过冻融法转入根癌农杆菌eha101中.以上西柿组培苗叶片为外植体,优化遗传转化体系,结果表明:农杆菌重悬液和共培养基中均添加200 μmol/l的as及spc梯度筛选能有效提高转化率.转化植株经pcr检测得到7株阳性植株.。

【题文】下图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。

据图回答：

4、将步骤2的酶切产物和步骤3的载体骨架连接，得到重组质粒pgagz a a-hsa。据已测序的上西早生柿etr5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,pcr扩增到2个etr5-uenishiwase基因片段.2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断.连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载体psmak321的35s启动子和nos终止子之间,构建成uenishiwase-etr5基因的rna干扰植物表达载体.载体质粒经酶切鉴定正确后通过冻融法转入根癌农杆菌eha101中.以上西柿组培苗叶片为外植体,优化遗传转化体系,结果表明:农杆菌重悬液和共培养基中均添加200 μmol/l的as及spc梯度筛选能有效提高转化率.转化植株经pcr检测得到7株阳性植株.。通过连接酶将酶切后的pcr产物和质粒载体进行连接。

孩子的肠道还在生长过程中，黏膜细胞连接不完善，细胞间连接调节差，病原微生物相对容易入侵。它通过含有vii型胶原的锚原纤维与前弹力层中的锚块连接，起固定作用，又通过半桥粒和上皮基底细胞连接，黏附上皮细胞。[0042]将处在对数生长期的enn11-3绿色游动细胞接种在配制好的海水培养基(配方见表1)中，使细胞密度达到0d750为0.8-1.2之间，以野生型ennll为对照。

（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是。

我认为没有太大影响，orf正确就行，但是如果载体上启动子需要诱导物才能启动基因的表达的话，鉴于后序实验，建议用载体上的启动子，这样容易控制基因的表达。pcbp2 全长进行 sali/noti 酶切，插入事先用 sali/noti 酶切得到的大肠杆菌表达 载体 pet-28a 中,得到大肠杆菌表达质粒 pet-28a-pcbp2。据已测序的上西早生柿etr5基因序列,设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,pcr扩增到2个etr5-uenishiwase基因片段.2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断.连接片断经双酶切消化后,定向连接到植物表达载体psmak321的35s启动子和nos终止子之间,构建成uenishiwase-etr5基因的rna干扰植物表达载体.载体质粒经酶切鉴定正确后通过冻融法转入根癌农杆菌eha101中.以上西柿组培苗叶片为外植体,优化遗传转化体系,结果表明:农杆菌重悬液和共培养基中均添加200 μmol/l的as及spc梯度筛选能有效提高转化率.转化植株经pcr检测得到7株阳性植株.。