植物细胞SOD的提取与分离

植物细胞 SOD 的提取与分离陈翰 200913007012 梁羽 200913007011一 原理超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子（O-2）进行歧化反应，生成氧和过氧化氢：2O-2+H2=O2+H2O2 。植物叶片细胞中有较丰富的 SOD，通过组织或细胞破碎后，可用 PH7.8 的磷酸缓冲液提取。由于不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。二 材料和试剂（1）新鲜植物叶片（2）磷酸缓冲液：0.05mol/L，PH7.8 的磷酸缓冲液。（3）氯仿—乙醇混合溶剂：氯仿：无水乙醇=3:5（v/v）.（4）丙酮：用前冷却至 4~10℃。植物sod提取植物sod提取碳酸盐缓冲液：0.05mol/L，PH10.2.EDTA 溶液：0.1mol/L。肾上腺素液：2mol/L。2．主要仪器:（1）可见分光光度计 （2）万分之一分析天平 （3）离心机（4）冰箱 （5）光照箱：4 500Lux（6）带盖瓷盘 1 个/处理 （7）移液管架（8）研钵（9）离心管 5mL 数个 （10）微烧杯 10～15mL 8个/处理（11）移液管或加样器 0.5mL×4；1mL×2；2mL×2；5mL×1 （12）微量进样器50μL×2；100μL×2（13）烧杯 50mL×3；100mL×5；500mL×1；1 000mL×2（14）量筒 50mL×1；100mL×2(15）容量瓶 50mL×1；100mL×5；250mL×1；1 000mL×2 （16）细口瓶 125mL×5三 操作方法1 组织或细胞破碎称取 5g 左右植物新鲜叶片，置于研磨器中研磨，使组织或细胞破碎。

22 SOD 的提取将上述破碎组织或细胞，、加入 2~3 倍体积的 0.05mol/L，PH7.8 的磷酸缓冲液，继续研磨搅拌 20min，使 SOD 充分溶解到缓冲液中，然后用离心机在 5000 r/min 下，离心 15min，弃沉淀，得提取液。3 除杂蛋白提取液加入0.25倍体积的氯仿—乙醇混合溶剂搅拌15min，5000r/min,离心 15min，去杂蛋白沉淀，的粗酶液。 4 SOD 的沉淀分离将上述粗酶液加入等体积的冷丙酮，搅拌 15min，5000 r/min 离心15min，得沉淀 SOD。将沉淀溶于 0.05mol/L，PH7.8 的磷酸缓冲液中，于 55~60℃热处理15min，离心弃沉淀，得到 SOD 酶液。5 SOD 活力测定取 3 根小试管，按下表分别加进各种试剂和样品液。（ml）在加入肾上腺素前，充分摇匀并在 30℃水浴中预热 5min 至恒温。加入肾上腺素（空白管不加），继续保温反应2min,然后立即测定各管在480nm处的光密度。对照管于样品管的光密度值分别为 A 和 B。在上述条件下，SOD 抑制肾上腺素自氧化的 50%所需要的酶量定义为一个酶活力单位。

即：酶活力（单位）=(2*（A-B）*N)/A 式中N——样品稀释倍数2——抑制肾上腺素自氧化 50%的换算系数（100%/50%）。若以每毫升样品液的单位数表示，则按一下计算酶活力单位/ml={[2*（A-B）*N]/A}*(V/V1)=[26*(A-B)*N]/A式中 V——反应液体积（6.5ml）V1——样品液体积（0.5ml）最后，根据提取液、粗酶液和酶液的酶活力和体积，计算纯化器收率。