b胡萝卜素作用第课时　基因工程与克隆技术考点一　基因工程1．

第课时基因工程与克隆技术考点一基因工程1．(填空)2．基因工程的基本操作程序(填空)(1)目的基因的获取途径：方法 具体操作 直接分离 从自然界已有的物种中分离，如从?基因文库中获取 人工合成 化学合成 已知核苷酸序列的?较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板 逆转录法 以mRNA为模板，在?逆转录酶作用下人工合成 PCR技术扩增 原理：?DNA复制；条件：模板DNA、?引物、脱氧核苷酸、热稳定的?DNA聚合酶过程 (2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建：表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。启动子和终止子：启动子是RNA聚合酶结合位点，启动转录；终止子是终止转录的位点。(3)将目的基因导入受体细胞： 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 感受态细胞法(用Ca2＋处理) 受体细胞 受精卵、体细胞 受精卵 原核细胞 (4)目的基因的检测与鉴定：导入检测：DNA分子杂交技术(使用DNA探针)。表达检测个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等接种实验。3．蛋白质工程(填空)(1)启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用(2015·重庆卷，T6D)(×)(2)携带链霉素抗性基因受体菌的筛选必须通过分子检测(2014·天津卷，T4A)(×)(3)从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽P1。

目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽(√)(4)重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接(×)(5)每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点(√)1．为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将从陆地棉基因库中获取的酶D基因与位于拟南芥叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得转基因油菜品种。酶D基因、转运肽基因所含三种限制酶(ClaⅠ、SacⅠ、Xba)的切点如图所示。请回答下列问题：(1)用限制酶________和________酶处理两个基因后，可得到A、D端相连的目的基因。(2)将上述目的基因插入如图所示质粒的________中，构建________________，然后将其导入农杆菌中。(3)利用______________法将目的基因导入油菜叶片中，并通过筛选获得转基因油菜细胞，通过______________技术可培育成转基因油菜植株。(4)用______________法可检测转基因油菜的染色体DNA上是否插入了目的基因，用______________法可检测转基因油菜植株中的目的基因是否翻译成蛋白质。

解析：(1)用限制酶ClaⅠ和DNA连接酶处理两个基因后，就能得到A、D端相连的目的基因。(2)将上述目的基因插入题图所示质粒的T??DNA中，构建基因表达载体，并导入农杆菌中。(3)采用农杆菌转化法将目的基因导入油菜体细胞中。获得转基因油菜细胞后，可通过植物组织培养技术将其培育成转基因油菜植株。(4)用DNA分子杂交法可检测转基因油菜的染色体DNA上是否插入了目的基因，用抗原－抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的目的基因是否成功表达出相关的蛋白质。答案：(1)ClaⅠDNA连接(2)T??DNA基因表达载体(3)农杆菌转化植物组织培养(4)DNA分子杂交抗原—抗体杂交2．(2017·江苏高考)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过________获得________用于PCR扩增。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的________________位点。