农杆菌质粒载体_农杆菌质粒构成_农杆菌转化质粒

（16分）下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

（1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入，该培养基按用途划分属于。

（2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过实验来实现。

（3）Ti质粒的分子大小有200kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25kb（称为T—DNA）。在这一小部分的两端各有一个25bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。

①在构建的T—DNA过程中，还应该具有和等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。

②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T—DNA，如果给你一个不含T—DNA的质粒，你如何把它构建成含有T—DNA的质粒？。

下面是在农杆菌Ti质粒基础上构建的植物抗虫基因表达载体的示意图。请据图回答：

（1）为了扩大基因表达载体的数量，需将基因表达载体再植入农杆菌中并对农杆菌进行培养，此时，在培养农杆菌的培养基中应加入________，该培养基按用途划分属于________。

（2）带有抗虫基因的农杆菌进入棉花细胞后，要检测抗虫基因是否插入到棉花的染色体DNA上，常用的方法是________；要检测抗虫基因在棉花体内是否翻译成蛋白质，必需先从转基因棉花中提取蛋白质，再用相应的________方法来确定是否已形成毒蛋白；如果在个体水平上鉴定抗虫基因是否转化成功，可以通过________实验来实现。

（3）Ti质粒的分子大小有200 kb（千碱基对）左右，然而能进入植物细胞的只有一小部分约25 kb（称为T－DNA）。在这一小部分的两端各有一个25 bp（碱基对）长的重复序列LB和RB，这两个序列对这一小部分DNA进入植物细胞是不可缺少的。实验证明只要Ti质粒上保留了这两个序列，即使这两个序列之间的其它序列被不同程度地改变（如插入一个外源DNA片段），这一小部分也仍然可以转移并整合到植物的基因组中。

①在构建的T－DNA过程中，还应该具有________和________等结构，才能保证进入植物体的抗虫基因能够顺利表达。

②Ti质粒不同于其它质粒的最大特点就是它含有T－DNA，如果给你一个不含T－DNA的质粒，你如何把它构建成含有T－DNA的质粒？________。

下面是一项“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要，请回答：

发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物偏爱密码子的原则来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在C端加上KDEL的内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于CaMV 35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。

（1）此基因工程中的目的基因是_________，将人工合成的DNA片段拼接在一起，所需要的酶有_________。

（2）要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用_________技术。