浅析盐析法和等电点沉淀法的区别和联系

蛋白质的分离与纯化 （三） 蛋白质分离纯化的条件 与核酸不同，蛋白质离开天然的存在体系，其结构与活性变得极不稳定，因此，从生物材料中提纯各种靶蛋白均需要特定的条件。 亲和层析 电泳分离 蛋白纯品 精分离 粗分离 前处理 凝胶层析 生物体组织细胞 离心分离 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀法 蛋白质粗制品 蛋白质粗抽提液 组织粉碎 细胞裂解 蛋白释放 dna释放 离子交换层析 图3-3 蛋白质分离纯化的一般技术路线 （一） 技术路线的设计 蛋白质的分离与纯化 （二）分离纯化的总体原则 1、靶蛋白结构完整 严防降解和变性 2、靶蛋白的纯度要求 结构完整和高纯度才能达到高比活性目标。 蛋白质的分离与纯化 表3-2 各种组织细胞破碎方法 细菌、酵母 3酶解法 组织、培养细胞 2去垢剂 细菌、酵母 1有机溶剂 Ⅲ化学法 红细胞 4低渗裂解 细菌、病毒 3冷热交替法 培养细胞 2反复冻融法 细胞混悬液 1超声法 Ⅱ物理法 细菌、酵母 3研磨法 动物韧性组织 2捣碎法 机体软组织 1匀浆法 Ⅰ机械法 应用 细胞破碎方法 蛋白质的分离与纯化 四、蛋白质分离纯化方法 蛋白质分离纯化的方法很多，主要是根据蛋白分子之间特异性的差异，如分子大小，溶解度，电荷等建立起来的。

1、盐析沉淀法

还适用于氧化铝制备过程中赤泥的絮凝沉淀以及泥液分离，在此应用中，主要用于处理以无机物固体为主的中性悬浮液。２方法２．１乳清分离蛋白水解液的制备 称取５ ｇ乳清分离蛋白于锥形瓶，加入１００ ｍＬ蒸馏 水使其溶解。16.m13噬菌体dna的制备步骤 1单链m13噬菌体dna的制备包括小题机被侵染培养物的生长2离心沉淀细菌3用peg沉淀噬菌体颗粒4苯酚抽提分离噬菌体蛋白外壳5乙醇沉淀浓缩制得dna。

蛋白质类化合物的盐析沉淀手段通常有两种：一种是在固定蛋白质溶液的pH值与温度的前提下，添加盐来调节溶液离子强度以达到沉淀蛋白质的目的。此法常用于蛋白质粗制品的分级沉淀和酶制剂的制备等。另一种是在一定的离子强度下，调节溶液的pH值或温度以达到沉淀蛋白质的目的，此法适用于蛋白质的提纯精制以及饱和结晶等。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素有无机盐的种类、浓度、温度和pH值。一些蛋白分离公司提供蛋白质的提取和精制服务。美迪西是一家医药研发外包服务公司，提供蛋白质分离纯化技术服务。

由于该链状小硫分子室温下具有非常高的对钠电化学活性，放电过程中可完全被还原为na2s（图2），从而使得其基于硫质量计算的正极首圈放电容量高达1610 ma h g-1，是传统高温钠-硫电池中硫正极材料的理论容量的三倍。由于该链状小硫分子室温下具有非常高的对钠电化学活性，放电过程中可完全被还原为na2s，从而使得其基于硫质量计算的正极首圈放电容量高达1610mahg-1，是传统高温钠硫电池中硫正极材料的理论容量的3倍。光 2 铁氧还蛋 白(氧化态) 2 铁氧还蛋 白(还原态) 铁氧还蛋白 -硫氧还蛋 白还原酶 铁氧还蛋白 -硫氧还蛋 白还原酶硫氧还蛋白酶 (失活) 酶 (活性)硫氧还蛋白底物产物图 4.18 铁氧还蛋白-硫氧还蛋白系统将类囊体对光的感知与基质酶的活性联系起来。

2、等电点沉淀法

在生物工业中， 离子交换广泛用于氨基酸、 有机酸、 抗生素等工业，尤其是在抗生素工业中， 将发酵液中的抗生素通过离子交换的方法结合在离子交换树脂上， 然后在适当的条件下洗脱下来， 这样可以使目的分子从大量的溶液中浓缩到一个小的体积内， 体积缩减到原液的几十分之一， 同时杂质分子液大量的被除去， 得到纯度较高的抗生素。终端产物法是在同位素平衡后测定氨基酸室的周转速度，通过测定氨基酸分解代谢的某种终产物的产生速度确定氨基酸合成到蛋白质中的速度和蛋白质的分解速度，一般用于机体水平蛋白质代谢速度的测定。前体底物法通过测定一段时间内标记氨基酸合成到组织蛋白中引起的富集度变化测定组织蛋白的合成速度，此时得到的合成速度一般用每天合成的蛋白质量占该组织蛋白总量的百分比表示（ %/天），称为蛋白质合成比速度（fractional protein synthesis rate, fsr）。

3、盐析沉淀法和等电点沉淀优缺点之比

较

立刻饮服下列溶液，使其生成草酸钙沉淀：1、在200毫升水中，溶解30克丁酸钙或其它钙盐制成的溶液2、大量牛奶，可饮食用牛奶打溶的蛋白作镇痛剂。1二、沉淀溶解平衡的移动1.同离子效应与盐效应2. 酸度的影响3. 分步沉淀4. 沉淀的转化5. 沉淀的溶解课堂练习在baso4沉淀平衡系统中加入bacl2溶液，主要是 效应，baso4溶解度 。溶解 ～ 沉淀溶解 ＞沉淀，未饱和溶液溶解 ＜沉淀，过饱和溶液1. 溶度积常数kspksp称为溶度积常数，它是难溶强电解质在水溶液中沉淀－溶解平衡的平衡常数，反映了物质的溶解能力。

（2）盐析法多用于各种蛋白质和酶的分离纯化，等电沉淀法常用于氨基酸、蛋白质等两性物质的沉淀。

（3）盐析沉淀法不仅是蛋白质初级纯化的常用手段，在某些情况下还可以用于蛋白质的高度纯化。但是利用盐析沉淀得到的目标产物中含盐量较高，一般盐析在沉淀后，需要进行透析法、超滤法、电渗析法和葡萄糖凝胶过滤法等方法进行脱盐处理，才能进行后续的分离操作。相对盐析沉淀来说，等电点法的优点在于不需要除去后续的脱盐操作。

膨化破坏了蛋白质的三级结构，使蛋白质发生不可逆的变性，这种变性有利于蛋白质的消化，但同时蛋白质疏水集团暴露，可使其溶解度降低，当有大量淀粉存在时，氨基酸常与淀粉等糖类发生美拉德反应，一般的水抽滤法无法溶解这些蛋白质，使蛋白的分散指数（pdi值）减小，这种结合对蛋白起到了一定的保护作用，且结合后的物质很容易被动物胃肠道中分泌的酶分解，不影响蛋白质的消化。目前，在提取纯化ct3蛋白片段的研究中，尚未采用变性再复性方法制备gst-ct3融合蛋白，采用变性再复性的方法制备ct3蛋白有待于进一步研究。提取纯化程序是将工程菌破碎，包涵体洗涤，重组蛋白变性纯化，重组蛋白二次变性纯化，重组蛋白复性，离子交换层析，分子筛层析，即得重组蛋白，其具体工艺如下一、工程菌破碎1.取工程菌，按每克湿菌加5-10倍缓冲液(1)(20mmol/ltris-hcl(三羟甲基氨基甲烷-盐酸)，ph8.0)，洗涤细菌，于4℃离心，7000(rpm)×10min(分钟)，弃上清液。

一些蛋白分离公司提供的沉淀法分离法是分离蛋白质的常用技术之一，目前广泛用于实验室和工业规模蛋白质的回收、浓缩和纯化，也是血清蛋白质分离提取的主要手段核苷酸的等电点。将盐析沉淀法和等电点沉淀法和其他的沉淀方法一起使用，可提高沉淀效果。

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