木瓜价格便宜么_干细胞的应用_木瓜蛋白酶的提取(2)

各种力(如憎水键、氢键和离子键)等的存在和环境因素的影响，使其在上、下 相中的浓度不同。

将确定好的双水相物质调整好PH值后，加入到木瓜乳液中，混合离心，洗 脱后，用以测量其活力与纯度。木瓜蛋白酶的提取

(二)木瓜蛋白酶酶活力及纯度测定

1、 木瓜蛋白酶酶活力测定

在每支试管中加入250酪蛋白(1. O/ml), 37。C保温IO分钟，各试管中加入 适量的酶，37。C精确保温10分钟，之后加入5ml考马斯亮蓝溶液(100mg考马 斯亮蓝、50ml 95%乙醇、100ml 85%磷酸，定容至1000ml )混匀，室温放置20 分钟，测595加i的光吸收，对照蛋白浓度标准曲线查处相应的蛋白浓度，并计算 酶活力(取平均值)。 一个酶活力单位定义为37C, l分钟内水解lmg酪蛋白所需 酶量。

2、 木瓜蛋白酶纯度测定

FPLC中的离子交换层析可计算木瓜的蛋白的纯度。25个微升的纯化木瓜蛋 白酶(25G蛋白)在PH为10. 6的20mM甘氨酸-氢氧化钠緩冲区緩冲。木瓜蛋白 酶和其他蛋白随后洗脱后，使用编程线性梯度氯化钠从0至0. 5米(总量为24毫

5升)在液相色谱中的流速为1. Oml/分钟。记录色谱小块A280和梯度组成与洗脱 量，洗百分比的高峰地区的木瓜蛋白酶和其他蛋白质是从一个自动集成，木瓜 蛋白酶的纯度为指定的百分比峰面积木瓜蛋白酶对总峰面积。以此测定方法测 定用本发明方法提取的木瓜蛋白酶其纯度是99.63%,比现有技术提取的木瓜蛋 白酶纯度提高0. 32%。

权利要求

1、一种高纯度木瓜蛋白酶的提取方法，其特征在于其工艺步骤中所采用的工艺方法为(1)粗酶提取过程中使用Sephadex G100凝胶层析，进行粗酶的分离；(2)精酶提取过程中使用双水相萃取，提纯精酶。

全文摘要

本发明涉及一种高纯度木瓜蛋白酶的提取方法，将番木瓜的果实及乳汁充分利用，快速分离出粗酶，提高酶活回收率，并利用双水相萃取技术提高酶的纯度，为此在粗酶提取过程中使用Sephadex G100凝胶层析，进行粗酶的分离，此种方法可省去反复沉淀的步骤，使活力回收大大提高。精酶提取过程中使用双水相萃取，提纯精酶，此操作具有目标产物有较高的收率，不存在有机溶剂残留，分离过程经济，对木瓜蛋白酶的活性影响最小，所得到的木瓜蛋白酶产品活性高，酶回收率高，纯度高。

文档编号C12N9/50GK101560508SQ20091014353

公开日2009年10月21日 申请日期2009年6月4日 优先权日2009年6月4日

发明者羌利民 申请人:南通远大生物科技发展有限公司