[精品]大蒜中提取SOD提取

boc-l-丝氨酸生物过程技术：基因表达和分离纯化技术、dna重组及转基因技术、酶&蛋白质工程技术、细胞和原生质融合技术、酶和细胞固定化技术、动植物细胞大规模培养技术、动物胚胎工程技术、微生物发酵技术、生物反应工程、生物分离工程技术、下游技术、发酵培养技术等分析技术、生物分析、产品过程分析、高速筛选、生化分析、低分子自然产物、基因测序、生物芯片等。最早，国内出现空气治理包含了三大类的治理方向的产品，第一个就是化学类产品，这些化学类产品主要以氯化铵、生物转氨酶类、生物分解酶等为主，化学类产品最早出现是因为利用这类化学药剂的氧化能力，现在大家都知道有氧化能力的药剂有很多，而且很多都可以和甲醛发生反应。本论文的目的是通过比较１３一胡萝ｈ素的氧化方法，选择最佳氧化方法以 及剂量，并对氧化降解产物进行分离，并对分离组分进行生理研究，分析１３一 胡萝ｈ素氧化降解对细胞抑制／增殖实验，从而选择有生理活性的组分。

1969年 McCord 等重新发现这种蛋白， 并且发现了它们的生物活性， 弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质， 所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。 超氧化物歧化酶广泛存在于生物体内的含 Cu、 Zn、 Mn、 Fe 的金属酶类。 它作为生物体内重要的自由基清除剂， 可以清除体内多余的超阴离子， 在防御生物体氧化损伤方面起着重要作用。 离子（O2） 是人体氧代谢产物， 它在体内过多积累会引起炎症、 肿瘤、 色斑沉淀、 衰老等疾病， 超氧阴离子与生物体内许多疾病的发生和形成有关。 由于 SOD 能专一消除超氧阴离子而起到保护细胞的作用， SOD 作为一种药用酶， 具有广阔的应用前景， 并引起了国内外医药界、生物界和食品界的极大关注。 【正文】 本实验使用的是大蒜细胞中的超氧化物酶， 利用 SOD 不溶于丙酮， 可用丙酮将大蒜中的 SOD析出。 实验材料和试剂 （1） 新鲜蒜瓣， 市售 （2） 大蒜细胞， 通过细胞培养技术获得 （3） 磷酸缓冲液： 0. 05 PH7. 8 的磷酸缓冲溶液 （4） 氯仿-乙醇混合溶剂： 氯仿： 无水乙醇=3: 5（V/V）（5） 丙酮： 用前冷却至 4-10° 碳酸盐缓冲溶液： 0. 05mol/L， PH10. 2 EDTA 溶液： 0. 1mol/L 肾上腺素夜： 2mol/L 实验设备 研钵、 试管、 试管架、 烧杯、 滴管、 移液管、 吸耳球、 数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）、 可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）、 离心机（上海安亭科学仪器厂）操作方法1. 组织或细胞破碎 称取 5 克左右大蒜蒜瓣或大蒜细胞， 置于研磨器中研磨， 使组织或细胞破碎。

min-1离心20min取上清得到粗酶液，采用冷冻干燥将粗酶液浓缩，用于纯化。做蛋白质组学的前处理要用10%的tca/丙酮沉淀蛋白，之后用丙酮洗沉淀(沉淀要打散，不能呈块状)2~3次，离心去掉丙酮，剩余的一点点丙酮很容易就挥发了，立即加入蛋白质溶解液。(最好是较冷的三氯乙酸(tca)溶液,防止研磨时温度过 高使酶失活) ,研磨(用磨碎机磨) ,15000r/min 的冷冻离心机下离心 10 分钟,上清液为粗 酶液,用于抗坏...。

加入肾上腺素(空白管不加) ， 继续保温反应 2min ， 然后立即测定各管在 480nm 处的光密度。 对照管与样品管的光密度分别是 A 和 B。在上述条件下， SOD 抑制肾上腺素自氧化的 50%所需的酶量定义为一个酶活力单位。 即：酶活力（单位） =2·（A-B）· N/A 式中 N——样品稀释倍数；2——抑制肾上腺素自氧化 50%的换算系数（100%/50%）。 若以每毫升样品液的单位数表示， 则按下式计算： 酶活力单位/ml=2·（A-B）· N/A· (V/V1) =26·（A-B）· N/A 式中 V——反应液体积（6. 5）V1——样品液体积（0. 5）最后， 根据样品液、 粗酶液和酶液的酶活力和体积， 计算纯化器收率。 实验结果 样品管 5. 0 0. 5 — 0. 5 5. 0 0. 5 0. 5 — 0. 5 0. 5肾上腺素自氧化速率及 SOD 对肾上腺素自氧化素率的抑制 图中， 上面那根线代表： 肾上腺素自氧化速率， 测定波长为 480nm， 每隔 30s 定一次 A 值，共测 3 次， 其差值为每分钟的自氧化速率， 其具体值就是： 0.075，0.067大蒜提取sod， 0.065， 0.074。

下面那根线代表： SOD 对肾上腺素自氧化率的抑制， 在加肾上素前先加 SOD 液， 每隔 30s测定一次 A 值， 共测 3 次， 其差值为 SOD 对自氧化速率的抑制，0.040,大蒜提取sod， 0.045， 0.049. 根据酶活力单位的计算公式得： 酶液活力单位/ml=7.8U 研究和讨论 从实验结果可以看出: 超氧化物歧化酶能抑制肾上腺素自的氧化。 由此可推断出其在医学领域也有其特定的作用。 1. 抗氧化、 衰老医学报告指出， 随着现代人的生活、 工作压力越开越高， 而且生活中受到手机、 电脑等各种辐射性物体的辐射， 人的抗氧化能力的衰退期已提前至35岁左右。 人之所以会衰老， 老化迹象一点一滴出现， 如色素沉淀、 体力衰退、 是因为体内产生氧化作用， 光靠蔬果已经不足以消除人体内外共同形成的氧化压力。 抗氧化剂， 如超氧化物歧化酶的补充有助于降低氧化的速度， 减慢衰老的脚步， 清除老年机体代谢过程中所产生的过量超氧阴离子自由基。 延缓由于自由基侵害而出现的衰老现象。2. 预防疾病 “自由基” 是科学家最近才发现导致各种慢性病与老化的罪魁祸首， 说它是“万病之源”，是人体健康的大敌， 自由基对身体的伤害是日积月累的， 所以人要注意自由基对人体的伤害。

自由基造也是造成癌症的原因之最。 造成癌症的外部和内部原因很多， 但无论哪一因素最终都是以自由基为手段来破坏抑癌基因的表达使原癌基因起效而造成癌症的。 如果人体摄入比较适量的超氧化物酶， SOD 进入细胞后， DNA 得到有力的保护并进行有效的自我修复重新回到抑癌基因和原癌基因的平衡。 特别是接受癌症化疗的病患， 其体内的抗氧化能力会大大地降低， 万一低到某个程度， 自由基就会损害细胞、 黏膜、 五脏六腑、 脑、 中枢神经等． 所以癌症患者应及时补充抗氧化剂来维持好体力。 3. 抗疲劳过多的自由基在体内残存， 就犹如毒素蓄积体内一样， 会让人容易疲劳、 厌倦、 注意力不集中、 常常昏昏沉沉、 打哈欠。 超氧化物歧化酶能消除体内的过多自由基， 对熬夜加班的上班族， 应付考试所产生疲劳的学生， 在提振精神及集中注意力方面成效显著， 有助于他们工作及学习精力的提升。 影响实验结果的因素： 1. 实验中所提取到的提取液、 粗酶液、 酶液在未使用前最好将其先放在冰箱内， 因为在低温下能降低酶的活性， 防止酶活损失， 如果一直放在室内会导致酶活损失， 使所计算得到的酶活偏低。 2. 在样品管加入肾上腺素保温 2min 后立即测对照管及样品液的光密度值。

1、《中华美德书》 中华美德书编写组编著 上海科学普及出版 社2005年01月。低压差线性稳压器设计原理与应用i s b n ：9787111243861作 者：沙占友 王彦朋 马洪涛出 版 社：机械工业出版社出版时间：2008-07-01版 次：初版开 本：16开包 张：平装内容简介本书是国内第一部专门介绍低压差、超低压差线性稳压器设计的著作，详细阐述了低压差线性稳压器计算机辅助设计软件的新技术和新成果。 （3）基质：为内膜与嵴包围的空间含有很多酶，基质中有一条完整转录翻译体 系 （4）基粒：线粒体内膜的表面上突起的圆形颗粒，化学成分是 atp 合酶复合体 15、简述化学渗透假说的内容 答：解释氧化磷酸化作用机理的一种假说，该假说认为氧化磷酸化耦联的基本 原理是电子传递中自由差造成 h+穿膜传递，暂时转变为横跨线粒体内膜的电化 学质子梯度，然后质子顺浓度梯度回流并释放相互能量，驱动结合在内膜上的 atp 合酶，催化 adp 磷酸化合成 atp。