实验四 大蒜细胞SOD的提取和分离

二氧化氯对微生物的杀灭原理是：二氧化氯对细胞壁有较好的吸附性和透过性能，可有效地氧化细胞内含疏基的酶。 （3）基质：为内膜与嵴包围的空间含有很多酶，基质中有一条完整转录翻译体 系 （4）基粒：线粒体内膜的表面上突起的圆形颗粒，化学成分是 atp 合酶复合体 15、简述化学渗透假说的内容 答：解释氧化磷酸化作用机理的一种假说，该假说认为氧化磷酸化耦联的基本 原理是电子传递中自由差造成 h+穿膜传递大蒜提取sod，暂时转变为横跨线粒体内膜的电化 学质子梯度，然后质子顺浓度梯度回流并释放相互能量，驱动结合在内膜上的 atp 合酶，催化 adp 磷酸化合成 atp。是根据植物细胞壁的构成, 利用酶反应具有高度专一性的特点选择相应的酶, 将细胞壁的组成成分( 纤维素、半纤维素和果胶质) 水解或降解, 破坏细胞壁结构, 使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中, 从而达到提取目的, 且有利于提高提取率。

抗坏血酸VC、VE 和还原型谷胱甘肽GSH等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。 SOD、 CAT 等活性氧清除剂的含量水平和O2.、 H2O2、 OH. 和O2 等活性氧的含量水平可作为植物衰老的生理生化指标。 SOD 是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SODMnSOD 和Cu.ZnSOD它们可催化下列反应 O2. O2. 2HSOD → H2O2O2 H2O2CAT → H2O  1/2O2 由于超氧自由基O2.为不稳定自由基寿命极短测定 SOD 活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定 SOD 的活力。 邻苯三酚在碱性条件下可迅速自氧化,释放出 O2-,生成带色的中间产物 在 420nm 有最大吸收峰。 邻苯三酚自氧化产生的中间产物在 40s-3min这段时间生成物与时间有较好的线性关系。颜色深→SOD 逐渐增多→颜色浅即酶活力越大颜色越浅。 [器材与试剂] 一、器材 恒温水浴锅、冷冻高速离心机、可见分光光度计、玻璃研钵、玻棒、烧杯、量筒、精密pH 试纸 二、材料和试剂 1、新鲜蒜瓣 2、 A液 pH8.2,0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲溶液(内含1mmol/EDTA-2Na)。

称取1.2114gTri和37.2mgEDTA2Na溶于62.4ml0.1mol/L盐酸溶液中 用蒸馏水定容至100ml.缓冲液需调 pH8.2 3、B 液4.5mmol/L 邻苯三酚盐溶液。称取邻苯三酚(A.R)56.7mg 溶于少量 10mmol/L盐酸溶液并定容到 100mL. 2 4、10mmol/L 盐酸溶液 注常用的浓盐酸是 37%-38%密度为 1.19g/ml, 浓盐酸摩尔浓度约 11.7 5、0.05mol/L 磷酸缓冲液(pH7.8)自查先分别配置 pH7.8Na2HPO4和 NaH2PO4溶液后以适当配比组成) 6、氯仿-乙醇混合液氯仿:无水乙醇=3:5 7、丙酮用前需预冷至 4-10℃ [实验步骤] 1、组织细胞破碎称取 3g 大蒜蒜瓣置于预冷研钵中加入少量的石英砂及 5mL 0.05mol/L 磷酸缓冲液冰浴上研磨成匀浆移入 15mL 离心管。用 5mL 磷酸缓冲液冲洗研钵洗涤并入离心管中磷酸缓冲液的最终体积为 10mL全部转入离心管中在 5000rpm下离心 15min取上清液提取液 。留出 1ml 备用准确量取剩余上清液体积。

min-1离心20min取上清得到粗酶液，采用冷冻干燥将粗酶液浓缩，用于纯化。 真核生物基因组dna的分离纯化—酚抽提法 人外周血dna的提取步骤 真核生物基因组dna的分离纯化—酚抽提法 人全血dna提取步骤 标本前处理（溶血、裂解白细胞） 取约2 ml肝素抗凝全血于无菌离心管内 ↓3000 r/m离心5 min 弃上清（血浆），加入适量无菌生理盐水 ↓3000 r/m离心5 min 弃上清大蒜提取sod，加入约5倍体积无菌双蒸水 ↓4000 r/m离心10 min 弃上清，加入约5倍体积双蒸水重悬白细胞 ↓ 4000 r/m离心10 min（重复） 弃上清。离心沉淀后取上清液即1%菠萝酶液。