4多聚甲醛固定来源：夹闭坐骨神经干导致坐骨神经损伤模式动物品

51 公正的惩罚 nemesis(1)（急先锋，而霸王龙的目的在于要找出坠毁的autobot母船“方舟”(ark)，因此可以从人型模式变形成为动物模式。开县的旅游除了刘帅纪念馆及故居、雪宝山等几个旅游景点，很大部分还得靠这些大投资的自造的景点：圈地、栽花、种草、引进稀奇动物……模式有收益，然后跟风，一个个农家乐如雨后春笋般涌出，到底人们来旅游是为了什么。

实验分组：对照组，模型组，阳性药物组，受试药物组(三个剂量梯度组)，15只每组

实验周期：4 weeks

建模方法

收缩骨盆肌肉并保持3秒钟。”两性专家布里·曾丹博士指出，女性只需每天进行5到10次锻炼，每次收缩阴道肌肉2到4秒钟，一个月后就能感受到变化。

后期取材：将取出的动物饲养一周，结束后，注射水合氯醛麻醉大鼠，将鼠仰卧位固定于大鼠固定架上。自颌下至小腹行胸、复联合切口，切断肋骨，剪断膈肌，暴露出跳动的心脏。用16号针头由左心尖刺入左心室，用软静脉留置导管沿左心室经主动脉瓣插入主动脉，剪开右心耳。先用0.9%生理盐水250ml快速冲洗组织内血液，其后用4%多聚甲醛固定液快速推注100ml，再缓慢推注100ml，直至使鼠尾巴翘起，身体逐渐僵硬，颜色变白为止。4多聚甲醛固定灌注后，立即将身体一僵硬的鼠于俯卧位固定于手术台上，由胸-骶部沿脊柱正中切开，暴露及分离背部肌肉，沿十二肋肌部切断T12 L1水平脊柱、脊髓。沿坐骨神经走行切腰4、腰5、骶1段脊髓和包括挤压伤在内的上下各2mm的坐骨神经。同法切取假手术组的相应部位等长标本。分三种方法进行处理及固定。(1) 4%多聚甲醛固定液中固定，制备石蜡切片。(2) 2.5%戊二醛液固定后，备做电镜。4多聚甲醛固定(3)液氮中冷冻，备做冰冻切片。

应用：疾病模型

组织病理学

1、大鼠坐骨组织病理检查

坐骨神经组织在4%多聚甲醛中固定24 小时后，包埋成石蜡块。石蜡块放在-20℃冰箱中冰一下，在切片机上进行切片，切片厚度4um，置于水槽中展开、捞片和贴片。石蜡切片切好后需要烤片，60℃烤片2 小时。进行Loyez苏木精染色，光镜下观察再生髓鞘的情况。

2、 TUNEL检测坐骨神经组织凋亡情况

坐骨神经组织切片脱蜡，蛋白酶K室温下消化，TDT酶反应液37℃孵育 1 h，0.3%H2O2抑制内源性过氧化物酶，Streptavidin-HRP 室温5min，DAB 显色，苏木精复染。阴性对照采用无酶标记液（去除TDT）代替TDT酶反应液。凋亡细胞核呈棕褐色颗粒，光镜下观察并计数凋亡细胞。

3、电镜观察自噬情况

坐骨神经组织2.5%戊二醛液固定，制备电镜样品，利用电镜在超微结构水平观察坐骨神经组织中自噬情况。